细菌生物学诊断 3页

细菌生物学诊断一葡萄球菌①标本的采集，直接涂片检查化脓性病灶采取脓汁、渗出液；乳腺炎取乳汁败血症取血液；脑膜炎采取脑脊液；食物中毒则分别采集剩余的食物、呕吐物和粪便将病料涂片染色镜检，如见有大量典型葡萄球菌可作出初步诊断②分离培养鉴定•将病料划线接种于5%绵羊或兔血液琼脂平板，37°C培养18-24h,菌落金黄色，周I韦I呈溶血圈者多为致病菌株。•血液、剩余食品、呕吐物、粪便等病料需经增菌肉汤培养后再划线接种血平板。③病原性鉴定：溶血性试验，甘露醇发酵试验，血浆凝固酶试验，菌落颜色，耐热核酸酶，动物试验④肠毒素鉴定：a动物试验：食物屮毒剩余食物或呕吐物一分离的葡萄球菌一普通肉汤屮-置30%CO2培养40h-离心沉淀取上清液,100°C30min加热后一幼猫静脉或腹腔内一15min到2h出现寒战、呕吐、腹泻等急性胃肠炎症状，表明有肠毒素存在。b采用ELISA法可快速检测微量的肠毒素，c应用DNA探针杂交技术则可直接检岀肠毒素的阳性菌株。二链球菌屈1、病料(脓汁、乳汁、血液、组织)涂片染色镜检，见革一兰氏阳性、具荚膜，成对或链状排列的球菌，可作初步诊断。2、确诊需用血液琼脂平板分离培养，观察菌落、溶血等特征，并进行生理生化试验。3、用群、型特界性血清作血清学试验，对病原菌定群或定型4、近儿年已将分子生物学手段用于致病性链球菌的检测。三•芽他杆菌属炭疽杆菌①死于炭疽的病备尸体严禁剖检，②只能自耳根部采取血液，必要时可切开肋间采取脾脏。③皮肤炭疽可釆取病灶水肿液或渗出物④肠炭疽可采取粪便。⑤若已错剖畜戶，则可采取脾、肝等进行检验。四肠杆菌1.病料的分离与培养①对未污染的被检组织可直接在普通琼脂、血琼脂或鉴别培养基平板上划线分离,②但已污染的被检材料如饮水、粪便、饲料、肠内容物和已败坏组织等，因含杂菌数远超过沙门氏菌，故常需要增菌培养基增菌后再行分离2可疑菌落的生化鉴定①挑取鉴别培养基上的可疑菌落儿个分别纯培养，并同时分别接种三糖铁(TSI)琼脂和尿素琼脂，37°C培养24h；②若有二者反应结果均符合沙门氏菌者取其TSI琼脂的培养物或与其相应\n菌落的纯培养物做沙门氏菌O抗原群和生化特性的进一步鉴定试验。①必耍时可做血清型分型。3血清型分析①首先应用分群抗0血清（A・F群）作凝集试验，以鉴定其群别。②然后使用O抗原单因子血清来测定待检菌的O抗原组成③查沙门氏菌抗原表，取可能的第一或第二抗H血清以测定其单相H抗原。鉴定出该菌的血清型五巴氏杆菌1•显微镜检查取病死猪肺坏死组织、胸水、鼻及气管渗出物作涂片，显微镜检查是否有革兰氏阴性两极染色的球杆菌。2分离鉴定培养六布氏杆菌（不重耍，无意义）1布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查，细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。2发达国家规定凡涉及本菌样本检测应在生物安全2级实验室进行涉及本菌培养则需在生物安全3级实验室操作七李氏杆菌1肝、脾、脑组织等涂片、可见G+小杆菌；2、分离培养：BCM或ALOA培养基，蓝绿光泽的菌落,血液葡萄糖琼脂,露滴状菌落，卩溶血3、细菌含虽少的检材，4°C冷增菌。4、纯培养：溶血检查、运动性检查、生化特性鉴定5、动物试验:病料眼内接种家兔或豚鼠，1天后发生结膜炎，不久败血症死广；妊娠2周的动物被接种后可发生流产八分支杆菌1、显微镜检查：取患病动物结节及病变与非病变交界处组织直接涂片，抗酸染色后镜检，如发现红色成从杆菌时，可做出初步诊断。2分离培养：将病料屮加入6%硫酸或4%NaOH溶液处理15min后，经屮和、离心，取少许沉淀物接种在培养基斜面上，每份病料接4〜6管，管口封严，置37°C培养8周，每周观察一次，培养阳性时，需进行培养特性和生化特性鉴定。3动物试验：将上述经处理的供分离培养用的病料接种于动物，皮下或腹腔注射0.5ml4.变态反应采用PPD皮内注射法\n病毒诊断一新城疫病毒（单负链RNA病毒）1临床症状、病理解剖，初步诊断2病毒分离，HA试验：检验是否含有病毒荧光抗体：检查病料中病毒;ELISA；中和试验；电镜；HI抗体的水平是衡量免疫力的指标3毒力鉴定：致病指数；F裂解位点碱性氨基酸；ELISAKite二狂犬病（单负链RNA病毒）①狂犬：尼氏小体的检杏，病毒抗原的检测。②病人：病焉抗原的检查（IF）；ORNA的检测（PCR法）三猪瘟病莓1）病料的采集•高热期的血液、淋巴结、脾和扁桃体；•慢性病例可采集流产胎儿和死产猪的脏器。2）荧光抗体试验3）酶标抗体技术：组化法和ELIS