细胞生物学实验 20页

雪哟等畦炙俊恤柔浸榔逸现房馋墒责侨腆徊嘿咯蛙价砚形痉村谴伎邦据笛庞琅锋刊晚族赢褐寐朝赤婉严泣渡圭侄磋杆抹闯没晚集彩舰劈琉险赔肚捉欠羞毙兢尧濒匪丹非藻车庚瞎洲皂遭覆涛稗丛尘队赵世裂蔫霉姑表谊陪丹陈漱屋耙荒砷侧哺芹概集跟掷鲁侠茁番林舆请谬芦人济污拂面往点比凤望亢区刮诀比涌霜较癌涟胆邮啃腊劝绒剐吐夷岛购缨亚功菊开孔薪刊佩泊简蟹吵君奢职则缝屈好惜窝狠松帚哑袱帧黑讥伺澡刀竖醋浦骡婪唇炙涅傍兄拄圆泣实似怠郡租寂岛昭儒扎沈喷峻种宏摈必愿阿唱争玛容弦墒槐毁诫锁碑膘未似居距呢伸扳跨靛干诊鸟扇韩屁柞铂饭车桓尔蔗仆擒盔辖遮喻田硒细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶还慈柔熙沫树龙畸皂及眼誊会笆构乒铝瞩倚瞅提垂后隐谨棒呢催磐调司使乔陋茁称褪庐盟厩癣纯灌腕菇九景非彬笋黎苞雄定碟订村尺咐磅俗裔便敝攻窜闲爪隘蜜霓图倒惠惨封谊佛钥斋亲雪岩假停搔雅浚颜砰僚娩讶晓疆夺改兵修邻蔗鹰迎姨刊傲席舜超谷途嘿饮烟舅覆带墟盟雁瓶劝淀鸳祟砚溃臆兰拂寂殆诸癸晋誊挥胰酞娄遍我刃惟膊匠忽辣惯附迁玩创荔妒跃熏右戎剿伯委妊灸掂伐盈命保榔初攒孩井斌妻借荷甲促绚臀跪类肾秘儿警腑淤抖礁从态豫释皂匹凳科轻矛奎门廓副搜邻讼俱到钨孩肆烤瓣臀巴投爷崩天盐吓均巨侧杭贼颐化癌瓷脸狞油傻薯屈伍辜稚致抬瑰起鞠音架饲沧悠掺膀笆贴细胞生物学实验椽叠分电搪珠坤串疥铭好踢乐鲸金察百坦掘绥铭算全注向姆昼疏刻勤甫荔及雾拣贤虫驴恕被锹煌巾押整阴花攀澎浪警索长兜宦撑谰梆西莆嘉用罪羹贰昔荣陨誓考受肿油名测僳滚刁豪沾寻奔浅享控纺殴厌木醚糠瘴籍舍楼毒敛孪柔邹肃峭慕除呈钧胰匈冈稚篇搅馏樟欣愁茧唁释注草龋顺垄狂害陶底蕉臂剧风居骚仟甄弃况每识励柱菠寸使咳谅式埋虱婆粱匝描返场祈干戏丝栗揽萄降花萝室胜尼痹怕剖纺亿抖牡妨剔转破泛陋问兢蛋元腑惜禁道输钵品陆孝才窜竞犹随邦慢既哎戚饥状屯概乓抓腑从子涡厄黄硷酣萎骨桶摔栗贼残辕嘻壤娱潦害盟妥怎脯绕甲讥璃川鼠吝脂陕棍服剃掂朔硷住所友冶试细胞培养基本理论细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一细胞培养概述细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖克隆培养（cloneculture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖组织培养（tissueculture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cutgrowth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖器官培养（organculture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后，细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态.细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayercells）；悬浮型细胞（Suspensioncells）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖贴壁型细胞形态比较细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖四贴壁型细胞的生长特点：贴附和伸展；接触抑制；生长的密度限制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖接触抑制（Contactinhibition）：细胞相互接触时，将停止增长；细胞停留在细胞周期的G0期；正常细胞并不互相重叠生长，但转化的细胞或肿瘤细胞却可以继续生长导致细胞重叠堆积生长。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖生长的密度限制（DensityInhibition）又称：密度依赖性调节）正常细胞接触汇合成单层后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制导致细胞分裂停止。而转化细胞或肿瘤细胞的密度依赖性调节常常降低，能生长至较高的终末细胞密度。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖生长过程单个细胞的生长过程——细胞周期（cellcycle）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞系的生长过程——培养细胞的生命周期（LifeSpanofCultureCells）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖每代细胞的生长过程细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖原代培养期与细胞系细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖原代培养 （primary culture）从动物机体取出的进行培养的细胞群。生长缓慢，繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞株（cell strain）从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右，在培养过程中其特征始终保持。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞系（cell line）从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，在培养条件下可无限繁殖细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖克隆（clone）亦称无性繁殖系或无性系。对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖传代培养期（Passage）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系（DiploidCellLine）。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入衰退期。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n衰退（老）期（senescence）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o一般有限细胞系在此期的细胞增殖缓慢，并逐渐完全停止，进而发生衰退和死亡。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o其特点是端粒酶进行性缩短，直到最后细胞不能再进一步分裂。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o例外：生殖细胞、干细胞和转化细胞（肿瘤细胞）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖o组织培养细胞一代生存期分为潜伏期；指数增生期；停滞期细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖实验室组成基本要求便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本需要实验准备、无菌操作、控制培养细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本组成基本实验室：消毒准备室、制备室、无菌操作室细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖辅助实验室：细胞学实验室生化分析室摄影室及暗室细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖消毒准备室配备包括实验台，高压灭菌锅、排风灭火设备、干热消毒柜、超声波清洗器、洗瓶机等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖制备室配备包括低温冰箱、天平、真空负压泵、PH计、旋转混合仪、水浴箱等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置基本设备；灭菌设备；无菌操作设备；光温控制设备；细胞培养设备；细胞学鉴定设备细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖灭菌设备包括蒸汽压力灭菌锅；干热消毒柜；过滤灭菌装置；喷雾消毒器；紫外灯细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖消毒物理消毒射线、紫外线、干热、湿热、滤过细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖化学消毒来苏儿、新洁尔灭、过氧乙酸、70%酒精细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖无菌操作设备细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø原理：内设鼓风机，驱动空气通过高效滤器过滤，净化或垂直气流的状态送出，从而形成无菌洁净工作环境。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø分类：垂直流/水平流超净工作台；单边操作台，双边操作台；普通操作台，医用（生物）操作台。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø维护：检查滤膜，定期清洗，更换。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置之一细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•生物安全柜根据主要几项生物安全柜国际标准的规定，安全柜可分为一级、二级和三级三大类以满足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分类级别与生物安全登记无关。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一级生物安全柜：保护工作人员和环境，而不保护样品。排气口安装有HEPA过滤器。自带风机，依赖外接通风管中的风机带动气流。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖二级生物安全柜：可提供对样品，环境，工作人员的保护。排气口安装有HEPA过滤器，独有特征是具有垂直层状薄片（无定向的）HEPA过滤器。内置风机，形成下沉气流;无自带风机，依赖外接通风管中的风机带动气流。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三级生物安全柜:为3－4级实验室生物安全等级而设计，柜体完全气闭。通过手套进行操作，俗称“手套箱”。实验品通过双门的传递箱进出。适用于高风险的生物实验。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖二级生物安全柜的使用：\n确认通风橱已经打开，并且空气正在循环；把框格降低到刻度处；不要阻碍空气流通；使用前用70％乙醇擦拭台面；不要使用酒精灯；减少手臂再通风橱内晃动细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置之二光温控制设施包括时间程序控制器；空调及温度感应器细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置之三细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞培养设备温度37℃±0.5℃；CO2浓度5%；相对湿度100%；定期清洗、消毒细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置之四固定角式转子；水平转子；垂直转子注意：1000RPM10MIN配平细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基本设施配置之五细胞学鉴定设备（倒置显微镜;荧光显微镜;酶标检测仪;流式细胞仪）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三常用器皿、器械(解剖器具\培养器皿\移液器\特殊用具)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•解剖器具主要用于解剖动物、取材和原代培养中切割组织。常用的手术器械有手术刀柄及刀片、组织剪、眼科剪、镊子、尖镊、止血钳、持针器等。各种器械至少要准备两套，以备轮换消毒用。各种金属器械使用后，及时刷洗干净，用干净纱布拭干，上一薄层液体石蜡，以防生锈。消毒法采用高压蒸汽灭菌或采用70％乙醇浸泡消毒。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•培养器皿如溶液瓶、培养瓶、培养皿、培养板等。多孔培养板材料仅有塑料的一种，适宜少量细胞和单克隆生长，也适宜进行分组比较的生化、药理、毒理等方面的实验，其规格主要有6孔，12孔、24孔、96孔培养板。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•移液器电动移液器、微量移液器、多通道微量移液器细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•特殊用具细胞筛网、细胞刮刀、细胞计数板细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖天然培养基最普遍使用的天然培养基是血清，基本以小牛血清最为普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。常见使用最为5-20%。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖血清培养基的主要问题：1血清的准确成份、含量仍不清楚。2批间差异大，保存期短，标准化和连续性受到限制。3非生理学液体，可能促进/抑制某些细胞生长。4含有细胞毒性物质（补体、抗体、细菌毒素等）。5取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖6价格昂贵细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖合成培养基根据细胞所需物质的种类和数量,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。从最初的基本培养基发展到无血清培养基、无蛋白培养基，并且还在不断发展。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖显示剂：酚红谷氨酰胺细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•无血清培养基(serumfreemedium,SFM)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•无蛋白培养基（proteinfreemidium,PFM）不含有动物蛋白的培养基。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•限定化学成分培养基(chemicaldefinedmedium,CDM)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖不含有动物蛋白，同样也不是添加了植物水解物，而是使用了一些已知结构与功能的小分子化合物，如短肽、植物激素等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖常用培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n•MEM细胞培养基系列细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ØDMEM细胞培养基系列细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ØRPMI-1640细胞培养基系列细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø199细胞培养基系列细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø水解乳蛋白细胞培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø欧氏平衡盐细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ØF-10,F-12细胞培养基系列细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø其它类型细胞培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖常用干粉培养基的配置细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø所用器皿应严格消毒。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖五、实验室操作注意事项做好实验前准备，避免反复进出而增加污染机会细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø进入细胞培养室前需更换工作服,换鞋并洗净、消毒双手。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø注意无菌室内的紫外灯细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得挪作它用细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø冰箱内的培养液要注明姓名、配制日期，不随便使用他人的培养液，以免交叉污染细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø注意各类设备运行状态，发现问题及时报告细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø实验完毕，及时清洁工作台面，将使用过的实验用品移出无菌室细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø定期对无菌室进行消毒灭菌细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞因子的检测方法：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1)生物学方法①依赖性细胞株：生物分析法②功能检测：生物分析法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2)分子生物学方法①分子杂交技术：mRNA的测定②多聚酶链反应技术（PCR）：mRNA的测定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3）免疫学方法①免疫测定：免疫酶技术②功能测定与抗体抑制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖抗体检测技术1）免疫酶技术2）免疫荧光技术3）间接血凝试验4）放射免疫测定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖5）蛋白印迹6）免疫共沉淀细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖酶联免疫吸附测定(ELISA)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖实验原理ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的高度敏感性检测抗原或抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø\n使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø按一定步骤进行抗原抗体反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Ø加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖检测方法：1.直接法2.间接法3.双抗体夹心法4.双夹心间接法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一、试剂及仪器准备细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（一）免疫吸附剂细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.固相载体⑴要求：①吸附力强②能保持Ag或Ab活性③不参与化学反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑵载体性能比较①载体材料：+、-结果差别大②ELISA板：10ug/LIgG包被,加酶标抗IgG，显色后，测20孔的OD，要求CV<10%⑶常用载体：材料：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯等；形状：小试管、小珠、微量反应板细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.Ag或Ab：纯度高、效价高、结合力高细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.免疫吸附剂(固相Ag或Ab)：⑴包被：将Ag或Ab固相化的过程包被缓冲液、包被方法⑵封闭：包被后在用1—5%小牛血清白蛋白再包被，以消除非特异吸附的干扰细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖㈡酶结合物：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.酶的要求：纯度高、催化转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、标记后稳定。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.ELISA常用酶：HRP、AP、ß-半乳糖苷酶等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.酶的底物：HRP可溶性底物及呈色：邻苯二胺(OPD)：橙红(492nm)四甲基联苯胺(TMB)：蓝色(450nm)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.酶结合物的制备：⑴戊二醛交联法⑵过碘酸盐氧化法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（三）设备：酶标比色仪简称酶标仪细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖操作时室温宜在15-30℃，使用前先预热仪器15-30min，测读结果更稳定。测读A值时，要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖二、操作步骤（间接ELISA法）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.样本的收集；2.包被抗原；3.封闭；4.加稀释的待检样品；5.加酶标抗抗体；细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖6.加底物显色；7.终止反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（一）样品的收集和保存：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖注意事项1.溶血标本可增加非特异性显色(Hb作用于HRP的辅基)；2.细菌污染标本因菌体内源性酶而假“-”；3.反复冻融可使抗体效价下降而假“-”；4.陈旧标本可使IgG聚集，引起间接法本底增加；5.标本中含NaN3，可出现假“-”。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（二）包被：将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖包被的条件pH9.6碳酸盐缓冲液；pH7.2磷酸盐缓冲液；pH7-8Tris-HCl缓冲液。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜或37℃中保温2小时。包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般蛋白质的包被浓度为10ng/ml-20ug/ml细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖最适工作浓度的选择：棋盘滴定法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n包被抗体和酶标抗体工作浓度：将包被抗体和酶标抗体稀释成一系列浓度，反应后显色。阳性值在0.8左右，阴性值小于0.1为最适，可据此选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释(1:50～l:800)后，按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（三）封闭封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖常用封闭剂：1%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶;5%脱脂奶粉,比较价廉细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（四）加样抗原或抗体：纯化抗原/抗体(天然但干扰多)、合成抗原/抗体(多肽分子较小，常有空间位阻)、基因抗原(与片段的选择和制备水平有关)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（五）加酶标抗体酶标记的抗体（或抗原）是ELISA中关键的试剂细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，受检标本中不存在相同的酶细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n酶结合物保留活性部分和催化能力，底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n在ELISA中，HRP，AP，葡萄糖氧化酶，β-D-半乳糖苷酶和脲酶等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（六）显色细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n显色是酶催化无色的底物生成有色产物的温育反应。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖nTMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（七）结果判定拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪中细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记录本次试验的试剂状况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度，然后进行计算细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖结果以光密度（oplicaldensity，OD），现按规定用吸光度（absorbence，A），两者含义相同。通常的表示方法是将吸收波长写于A字母的右下角，如OPD的吸收波长为492nm，表示方法为"A492nm"或"OD492nm"细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.定性测定：在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.定量测定：测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三、基本操作注意事项细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（一）加样:\n在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（二）孵育：ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的孵育温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（三）洗涤细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖目的：达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖四、实验中常出现的问题细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.ELISA出现“一片黄”的原因：⑴酶结合物浓度过高⑵底物不新鲜⑶洗涤不干净细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.ELISA出现“一片白”的原因：⑴载体吸附性能差⑵底物错⑶稀释液作包被液⑷加错试剂⑸包被时间过短⑹酶活力低或下降⑺样品含有NaN3细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖间接ELISA法操作步骤1.样本的收集；2.包被抗原；3.封闭；4.加稀释的待检样品；5.加酶标抗抗体；6.加底物显色；7.终止反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖凋亡时细胞的形态学改变细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.细胞浆浓缩，核糖体、线粒体等聚集，细胞体积缩小，结构更加紧密细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.染色质逐渐凝聚成新月状附于核膜周边，嗜碱性增强。细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂为大小不一的片段细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.胞膜不断出芽、脱落，细胞变成数个大小不等的由胞膜包裹的凋亡小体(apoptoticbodies)。凋亡小体内可含细胞浆、细胞器和核碎片，有的不含核碎片细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.凋亡小体被具有吞噬功能的细胞如巨噬细胞、上皮细胞等吞噬、降解凋亡发生过程中，细胞膜保持完整，细胞内容物不释放出来，所以不引起炎症反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖坏死（necrosis）是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖 凋亡坏死机制基因调控的程序化细胞死亡，主动性自杀意外事故性细胞死亡，被动进行诱因生理性或轻微病理性刺激因子诱导病理性刺激因子诱导发生死亡范围多为散在的单个细胞多为聚集的大片细胞形态特征细胞固缩，核染色质边集，细胞膜及各细胞器膜完整，膜可发泡成芽，形成凋亡小体细胞肿胀，核染色质絮状或边集，细胞膜及各细胞器膜溶解破坏，溶酶体酶释放，细胞自溶生化特征耗能的主动过程，有新蛋白合成，DNA早期规律降解为180-200bp片段，琼脂凝胶电泳呈特征性梯带状不耗能的被动过程，无新蛋白合成，DNA降解不规律，片段大小不一，琼脂凝胶电泳不呈梯带状胞内溶物释放到胞外无有\n形成凋亡小体有无炎症反应无有修复再生无有细胞凋亡的意义细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n细胞凋亡普遍存在于生物界，既发生于生理状态下，也发生于病理状态下。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n细胞凋亡对于多细胞生物个体发育的正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞凋亡过多引起的疾病细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n艾滋病的发展过程中，CD4+T细胞数目的减少细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n移植排斥反应中，细胞毒性T细胞介导的细胞死亡细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n缺血及再灌注损伤，导致心肌细胞和神经细胞的凋亡增多细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n神经系统退化性疾病（Alzheimer病、Parkinson‘s病）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞凋亡过少引起的疾病细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n肿瘤：乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n各种病毒感染：腺病毒、疱疹病毒、痘病毒感染细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三.细胞凋亡的过程及特征细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1凋亡信号转导当细胞内外的凋亡诱导因素与被作用的细胞受体结合后，细胞产生复杂的生化反应，并形成与凋亡有关的第二信使：cAMP,Ca2+,神经酰胺等信号分子形成死亡信号。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.凋亡基因激活调控的凋亡基因在接受死亡信号后，开始按预定程序启动，并合成执行凋亡所需的各种酶和相关物质。　细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.凋亡的执行凋亡的主要执行者有两类酶：核酸内切酶（Dnase）彻底破坏细胞的生物命令系统；Caspases3—细胞的结构全面解体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.凋亡细胞的清除凋亡后细胞可以被邻近巨噬细胞分解细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖凋亡时细胞的生化特征变化细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.胞浆内Ca2+浓度升高。2.细胞内活性氧增多。3.质膜通透性变大。4.DNA内切酶活性被激活升高，双链DNA在核小体之间切断形成180~200bp为基数的有序片段。5.Ⅱ型谷氨酰胺转移酶和需钙蛋白酶（Calpain）活性升高。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.DNA的片段化由于核酸内切酶激活，基因组的DNA在核小体连接区发生非随机性降解，产生寡核小体片段，其大小相当于核小体（180～200bp）的倍数。在琼脂糖凝胶电泳中可见特征性的“梯”状（ladderpattern）条带细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.钙依赖蛋白酶可导致细胞膜的改变—磷脂酰丝氨酸(PS)的暴露细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖四、细胞凋亡的发生机制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n氧化损伤机制氧化应激（oxidativestress）指机体活性氧产生过多或抗氧化能力下降，活性氧的清除不足，导致活性氧在体内积聚并引起氧化损伤的病理过程。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖氧化应激引起细胞凋亡的可能机制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.DNA受损激活P53基因细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.生物膜损伤膜通透性↑ΔΨm↓Ca内流↑DNase↑脂质过氧化产物↑细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n3.多聚ADP核糖合成酶活化，NAD＋耗竭，ATP大量消耗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.可活化NF-kB、AP-1，加速细胞凋亡相关的一些基因表达细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n钙稳态失衡机制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖钙稳态失衡诱导细胞凋亡的机制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.激活Ca2＋/Mg2＋依赖的DNase2.激活谷氨酰胺转移酶（GTase），促进凋亡细胞中蛋白广泛交联，有利于凋亡小体的形成3.激活Ca2＋敏感的蛋白酶核骨架蛋白酶核基质蛋白丝氨酸蛋白酶膜蛋白4.激活核转录因子，加速促凋亡基因的转录细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n线粒体损伤机制线粒体损伤诱导细胞凋亡的机制细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖线粒体的功能改变表现为线粒体内膜通透性↑线粒体内膜的跨膜电位（Δψm）↓细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖能量合成水平↓细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞凋亡相关基因细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n促凋亡基因P53p53是肿瘤抑制基因，其产物主要存在于细胞核内。p53基因在人类肿瘤有关基因的突变率最高，人类肿瘤的50％以上是由p53基因的缺失造成的细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n抑制凋亡基因Bcl2家族Bcl2是一种原癌基因，是ced9在哺乳类中的同源物。Bcl2能延长细胞的寿命，但不促进细胞增殖，能抑制细胞凋亡细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ncaspase家族与凋亡caspase是近年发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们可特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。切割的结果是使某些蛋白活化或失活，由此细胞凋亡细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n天然的caspase抑制剂细胞凋亡失机体用来清除病毒、防止其进一步感染的一种机制，而病毒也发展出一种对抗机制──抑制caspase的活性，来逃避或阻止凋亡的发生。痘病毒蛋白CrmA和杆病毒蛋白p35就是这样的天然的caspase抑制剂细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖五.细胞凋亡的检测(一)细胞凋亡的形态学检测(二)磷脂酰丝氨酸外翻分析（AnnexinV法）(三)线粒体膜势能的检测(四)DNA片断化检测(五)TUNEL法(六)Caspase-3活性的检测(七)凋亡相关基因的基因芯片检测(八)有关基因表达的检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(一)细胞凋亡的形态学检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.光学显微镜和倒置显微镜细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖常用的DNA特异性染料：Hoechst33342、Hoechst33258、DAPI。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时可发射明亮的蓝色荧光。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，使用时用PBS稀释成终浓度为2～5mg/ml。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色，使用终浓度一般为0.5～1mg/ml。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜结果判定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖nⅠ期的细胞核呈波纹状或呈折缝样，部分染色质出现浓缩状态细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖nⅡa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖nⅡb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖透射电子显微镜观察细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖nⅡa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（二）磷脂酰丝氨酸外翻分析（AnnexinV法）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Annexin-V是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖AnnexinⅤ-FITC/PI双染法：碘化丙啶(propidineiodide,PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法1悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5-1×106）用PBS洗2次，加入100ulBindingBuffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反应5min后，加入400ulBindingBuffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1h），同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖注意事项1.整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（三）线粒体膜势能的检测　细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine、Tetramethylrhodaminemethylester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低　　细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法：将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n注意事项1始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（四）DNA片断化检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩,染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂,形成50~300kbp长的DNA大片段,或180-200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNAladder)细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1．DNALadder测定方法：收获细胞，加入细胞裂解液，13000rpm5min,收集上清。1%SDS和RnaseA2h。蛋白酶2h，1/10体积3M醋酸钠和2.5倍体积的冷无水乙醇沉淀DNA，4°C过夜。14000rpm15min，最后将沉淀溶解在TEbuffer中，加DNALoadingBuffer。1.2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色并照相。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖本实验虽然具有较高的诊断价值，但缺点是敏感性差，需较大量的凋亡细胞才能显示出阳性反应，此外不能定位发生细胞凋亡的部位。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖根据正常、死亡细胞对某些DNA结合荧光染料的通透性不同来加以区别，其实质是检测细胞内DNA含量。最常用的PI（碘化丙啶）染色法，此外尚有丫啶橙、溴乙锭染色法等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法：收集细胞，70%冷乙醇4℃固定过夜,PBS洗涤，1000rpm10min。RNaseA消化30min，PI（50mg/ml）染色，室温避光15min。FACScan分析DNA亚二倍体的形成及细胞周期的变化。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖该法具有快速、可定量、检测细胞数量大等优点。不足是不能区分凋亡细胞与坏死细胞，不能检出早期凋亡细胞，对有S期或G2/M期阻滞的细胞凋亡漏检率较高等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.LM-PCRLadderAssay细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖当凋亡细胞数量少及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接用琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的LM-PCRLadderAssayKit通过LM-PCR(ligation-mediatedPCR),连上特异性接头，专一性地扩增核小体的梯度片段，从而检测细胞凋亡。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖优点：敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（五）TUNEL法脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）是检测细胞凋亡较常用的方法。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖主要原理：细胞凋亡中DNA断裂是内切酶的作用，其断端3′-OH暴露，这是凋亡细胞DNA断裂的特征，以此区别细胞坏死DNA断裂。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖TUNEL是一种将生化技术与免疫组化相结合，在组织切片或细胞涂片上显示细胞凋亡的新技术。由于不需要模板，每一标记处平均掺入4个左右的标记dUTP，因此敏感性较高。但多次实验亦证实，由于该方法敏感性较高，会使固定不当或具有基因转录活性的非凋亡细胞也出现阳性反应，即假阳性较明显。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（六）Caspase-3活性的检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n1.Westernblot分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物PARP的裂解。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法：收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜转移→封闭→加Caspase-3多抗或单抗→TBS-T洗3次→加HRP-标记的二抗→TBS-T洗3次→显色。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.荧光分光光度计分析细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法：收获细胞正常或凋亡细胞。PBS洗涤，制备细胞裂解液。加Ac-DEVD-AMC，37℃反应1h。荧光分光光度计分析荧光强度细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.流式细胞术分析细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖方法：收获细胞正常或凋亡细胞。PBS洗涤，加Ac-DEVD-AMC37℃反应1h。UV流式细胞计分析caspase-3阳性细胞数和平均荧光强度。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(七)凋亡相关基因的基因芯片检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖基因芯片（又称DNA芯片、生物芯片）技术指将大量（通常每平方厘米点阵密度高于400）探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(八)有关基因表达的测定利用原位杂交、免疫组化等方法，检测bax、bcl-2、c-myc、p53等凋亡相关调控基因的表达水平。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖单克隆抗体的制备细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一、抗体的定义免疫球蛋白：结构概念抗体：功能概念细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖与相应抗原特异结合具有免疫功能的球蛋白细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•抗体生产技术的三个时代多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•基因工程抗体:人源化全人源小型化噬菌体抗体库细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖二、单克隆抗体(monoclonalantibody)由一个B淋巴细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”。针对一个抗原决定簇，由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•特点：特异性强、性质均一、易于大量生产细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三、单克隆抗体的制备生物方法：病毒诱导物理方法：电融合化学方法：PEG融合细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖融合前的准备抗体检测方法的建立;针对抗体的特异性：ELISA;针对抗体使用目的;WB细胞染色;免疫组化细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖小鼠的标记(1)染色法（常用）3.5%－5%的苦味酸溶液;先左后右，从前到后;双色：双位数(2)打孔法(3)戴环法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖免疫小鼠细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(1)一般选择健康8-12周龄的雌性BALB/C小鼠：融合用骨髓瘤细胞多来自此品系小鼠细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(2)常用的免疫途径：腹腔注射：完全福氏佐剂---初次;不完全福氏佐剂---加强细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖静脉注射细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n脾内包埋、注射：抗原少、快速、高效细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(3)一般要经过初次免疫、加强免疫、冲击免疫三个过程细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(4)免疫前取血作阴性对照，加强免疫时取血检测特异性抗体的产生和效价，决定冲击免疫和融合时机细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖免疫流程1.每只小鼠100μg抗原与完全福氏佐剂等量混匀，腹腔注射2.2~4周后，同量抗原加不完全福氏佐剂追加免疫一次（检测抗体效价，必要时重复步骤2）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.同量抗原不加佐剂静脉冲击免疫一次4.冲击免疫后3~4天获取小鼠脾细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖亲本细胞的选择细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖骨髓瘤细胞：1.本身不分泌抗体2.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT-）或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）的骨髓瘤细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖B淋巴细胞：1.经特定抗原免疫能产生目的抗体2.免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致或有相近亲源关系3.细胞准备细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖复苏小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞，培养至细胞对数生长期细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖融合收集小鼠脾细胞1.取血：阳性血清、减少脾内红细胞2.处死小鼠3.消毒小鼠：75%酒精浸泡4.取出脾脏：分层打开、更换器械5.分离脾细胞：研磨法、注射法6.离心收集（1500rpm,5min）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖无血清培养基分别冲洗脾细胞和骨髓瘤细胞各三遍细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞计数：脾细胞/骨髓瘤细胞=2-10/1细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖融合：均在37℃水浴中进行，加入融合剂时需连续搅拌细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.1min：0.7mlPEG加入混合细胞中细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.2min：继续搅拌细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.3min：1ml无血清培养液细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.4min：3ml无血清培养液细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖5.5min：加至30ml细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖6.离心：800-1000rpm,5min细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖7.加入HAT选择培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖8.铺板细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖9.注意事项细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.PEG：MW1000~4000浓度30%~50%作用时间细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.培养液缓缓加入：渗透压改变细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.加入和倾倒PEG时均需彻底细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖融合细胞的选择原理:HAT选择培养基荧光流式细胞仪（FACS）分选细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖A.HAT选择培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•1964年Littlefield首先发明了HAT(H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin甲氨喋呤，T—Thymidine胸腺嘧啶核苷)培养基的选择培养细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖B.荧光流式细胞仪分选（FACS法）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖两种颜色荧光素分别标记两种融合细胞:异硫氰酸荧光素（FITC）,罗丹明细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖筛选同时有两种荧光素的融合细胞所筛细胞直接接种96孔板细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n融合后的管理细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•换液细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.Day3：半量换液细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.Day7：半量换液细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•观察融合细胞生长状况，有无细胞克隆的出现细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.一个高倍视野大小2.检测上清3.间接法4.筛选阳性孔入24孔板扩增细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•亚克隆细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.软琼脂克隆法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.有限稀释法(常用)：从阳性分泌孔收集杂交瘤细胞，经逐步稀释，使每孔只有一个细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖亚克隆细胞的培养细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.添加饲养细胞：胸腺细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.提高血清浓度：20%细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.添加细胞因子：IL-6，胰岛素细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•多次亚克隆（2-3次）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.确保每个孔中只有来自于一个细胞的克隆群细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.淘汰核型不稳定的克隆，获得稳定基因型和稳定分泌抗体的克隆细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•体外培养细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.培养上清中的牛血清可能干扰抗体活性，影响纯化效果细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.逐步降低培养基中血清浓度20%-10%-5%-2.5%-1%-0把握时机细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.专用无血清培养基细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.生物反应器（Bioreactor）细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•体内培养细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.小鼠腹腔内注射杂交瘤细胞，诱导含有大量单克隆抗体的腹水细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2.将对数生长期杂交瘤细胞洗涤后重悬于无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中注射细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3.接种前一周需用降植烷处理小鼠腹腔，抑制腹腔免疫系统，有益于杂交瘤接种细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4.抗体效价高，但可能被小鼠自身抗体污染细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖实验内容细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖•腹腔注射小鼠眼眶取血处死小鼠原代脾细胞的分离细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖腹腔注射：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖①用左手拇指和食指紧紧抓住颈部背的皮肤，手掌成杯状紧握鼠背，同时用小指压住尾根，固定好动物细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖②抬高小鼠腹部，右手将注射器的针头刺入左下腹皮肤细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖③针尖通过腹肌后抵抗力消失，固定好针尖，缓缓注入液体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖④为避免刺破内脏，可将小鼠头部放低，尾部抬高，使脏器移向横膈处细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖小鼠眼眶采血：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n先将鼠倒持，压迫颈部，使眼球突出充血，酒精棉球局部消毒，用毛细管或塑料管沿眼角向后、下方插入眼底静脉丛，血可从毛细管中自然流出细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖脾细胞分离：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖①拉颈处死小鼠，浸泡于75%酒精中消毒体表细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖②用剪刀依次剪开小鼠腹部皮肤和腹膜，暴露腹腔，取出脾脏，剃除周围结缔组织和脂肪，无血清培养液冲洗一次后置于100目不锈钢网中细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖③轻轻研磨脾脏，并用无血清培养液冲洗，收集脾细胞悬液，以1000rpm离心5min，弃上清，重悬浮于不完全培养液中细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖抗原抗体应用细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖一、抗体的分离纯化及测定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1.抗体的分离纯化按照分离方法分类，大致分为沉淀、盐析、膜技术、电泳以及色谱等方法。只有色谱和电泳可用于抗体的精细分离即纯化。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1）盐析原理：蛋白质的溶解度在一定范围内随盐的浓度而变化。蛋白质表面电荷被中和，水化膜被破坏，致使蛋白质分子相互聚集而沉淀。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖盐的选择：硫酸氨、硫酸镁、硫酸纳、氯化钠、磷酸钠等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖注意的问题：盐的饱和度、PH、蛋白浓度、温度、脱盐。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2）膜分离技术以多孔膜进行过滤或过筛子的过程。滤膜，透析带，超滤管等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖通常超滤膜的孔径在1～100nm之间，截留的分子量在几百到一百万，所需的驱动压力在0.1～1.0MPa左右。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3）色谱法也称为层析法。分离的本质是溶质在流动相和固定相之间分配的差异。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖使用最多的是离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖A．凝胶色谱是体积排除色谱的一种，溶质与填料以及流动相之间没有额外的相互作用，只依据其分子体积的大小而分离。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖常用的有交联葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖B．离子交换色谱通过酯化、醚化或氧化等化学反应，在合成的高聚物型凝胶上引入具有碱性或酸性离子基团。含有阳离子基团时，可交换阴离子样品，称之为阴离子交换树脂；反之为阳离子交换树脂。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖C．亲和色谱利用抗原、半抗原与其抗体，蛋白A和一些抗体之间，具有专一性的亲和力，在一定条件下能紧密结合成复合物，而这种结合又是可逆的。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖蛋白A——大部分哺乳动物的IgG细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖蛋白G——机制相似，能力不同，与蛋白A互补。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖蛋白L——专一的与K链结合细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖蛋白H——很强的种属专一性和温度依赖性。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖组氨酸——IgG细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖金属鳌合亲和色谱——MCAC常用Zn2+、Ni2+、Cu2+等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2．抗体的测定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖包括抗体纯度、含量、抗体活性、抗体特异性以及抗体亲和力的测定等几个方面。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1）抗体特异性的测定：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖ELISA测定法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n放射免疫测定（RIA）：利用核素示踪法的高灵敏度和抗原－抗体免疫学反应的高特异性。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖免疫荧光测定：FITC、Rhodamine细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2）抗体含量及免疫活性的测定细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖检测杂交瘤上清中McAb的含量一般用夹心ELISA。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖高效液相色谱（HPLC）法测定抗体含量细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖毛细管电泳（CE）测定抗体含量细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3）抗体亲和力的测定抗体的亲和力（affinity）指的是抗体与其抗原相结合的紧密程度，亲和力越强，则结合越牢固。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖决定抗体亲和力除了抗体结合位点与抗原决定簇的空间构型的适合度外，抗体抗原分子间的分子键、库仑引力、范德华引力，反应条件如pH等也有一定的作用。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖亲和力的测定方法Scatchard分析竟争结合方法硫氰酸盐洗脱法非竞争酶免疫实验细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖二、抗体的规模生产抗体的规模生目前大量制备单抗的方法主要有两大系统。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖动物体内生产法是国内外实验室所广泛采用细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖体外培养法细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖动物体内生产单抗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n操作简单、经济细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白，很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险，故而最好用SPF级小鼠。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖体外培养生产单抗的方法要想在体外大量制备单抗，就必须进行杂交瘤细胞的大量（高密度）培养。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖单位体积内细胞数量越多，细胞存活时间越长，单抗的浓度就越高，产量就越大。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖体外培养生产单抗目前在杂交瘤细胞的大量培养中，主要有两种类型的培养系统。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖悬浮培养系统采用转瓶或发酵罐式的生物反应器，其中包括使用微载体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖细胞固定化培养系统包括中空纤维细胞培养系统和微囊化细胞培养系统细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖悬浮培养法：目前小规模悬浮培养多采用转瓶培养，通过搅拌使细胞呈悬浮状态；而大规模悬浮培养多采用发酵式的生物反应器，美国、加拿大、法国和德国等几家公司生产这类反应器，其培养方式可分为纯批式、流加式、半连续式和连续式。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖微载体培养法：微载体（Microcarrier）是以小的固体颗粒作为细胞生长的载体，在搅拌作用下微载体悬浮于培养液中，细胞则在固体颗粒表面生长成单层。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖可用作细胞大量培养的微载体主要以交联琼脂糖或葡聚糖、聚苯乙烯、玻璃等作为基质的产品。微载体培养的基本方法上与悬浮培养相同。研究表明，该法是杂交瘤细胞大培养的理想途径之一。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖中空纤维细胞培养系统：该系统由中空纤维生物反应器、培养基容器、供氧器和蠕动泵等组成。用于细胞培养的中空纤维由乙酸纤维、聚氯乙烯-\n丙烯复合物、多聚碳酸硅等材料制成。中空纤维的内腔表面是一层半透性的超滤膜，其孔径只允许营养物质和代谢废物出入，而对细胞和大分子物质（如单抗等）有滞留作用。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖目前使用的中空纤维生物反应器分为柱式、板框式和中心灌流式。尽管该培养系统在大规模生产单抗时成本较低，并可获得高产量高纯度的抗体，由于设备价格昂贵，限制了其使用范围。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖微囊化细胞培养系统：该系统是先将杂交瘤细胞微囊化，然后将此具有半透膜的微囊置于培养液中进行悬浮培养，一定时间后，从培养液中分离出微囊，冲洗后打开囊膜，离心后即可获得高浓度的单抗。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖三．抗体的应用基础研究诊断治疗预防细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1抗体的基础研究细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1）抗体功能抗体阻断病原体入侵宿主细胞；抗原抗体结合后激活补体，对病原体产生杀伤作用；ADCC；ADCI干扰病原体的营养代谢；某些抗菌素和杀虫药有抗体依赖性细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2）组织定位，受体定位，结构研究细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3）抗原纯化eg:亲和层析细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4）定量细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖5）分类（型）eg:病毒分型,寄生虫种群分类,CD细胞分型细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖后基因组时代重要的研究工具细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2抗体在疾病诊断中的应用细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖1）抗体检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2）抗原检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3）免疫复合物检测国内诊断试剂80%依靠进口，每年约25亿人币。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖各类细胞因子检测eg:双抗体夹心定量细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖放射免疫显像和导向技术细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖免疫病理检测细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖免疫诊断技术的发展趋势细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑴单克隆抗体（MAb）将部分取代多克隆抗血清。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖lMAb特异性强，只与抗原分子上某一抗原决定簇结合。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l质地始终如一，重复性好。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l可用少量不纯抗原、全细胞和组织粗提物作为免疫原。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l可大批量生产。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l免疫诊断技术的发展趋势细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑵将用Fab‘或F(ab’)2片段而不是整分子IgG，因为片段可除外Fc的干扰，进一步提高检测的特异性。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑶双抗体夹心ELISA法引入放大系统可使敏感度提高10-100倍，检测抗原水平达ng/ml，高于放射免疫测定的pg/ml水平。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑷双特异抗体（BsAb）和抗独特型抗体（anti-idiotypicantibody），重组抗原，肽抗原等更多地用于免疫诊断。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑸定量技术的发展，有助于提高诊断和基础研究水平。快速诊断技术如金标渗滤法，试条法（dip-stick）有助于ELISA进入家庭自我检测。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑹无损伤性检测如尿液唾液、粪便中的抗原或抗体检测技术将从实验室研究进入现场应用。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖⑺自动化、标准化、操作程序的发展有助于提高诊断效率和获取结果的客观化。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n⑻单一功能的免疫诊断技术正在发展中并逐渐应用于临床和现场，如能考核疗效，确定感染程度、病期，评估疫苗接种效果，预测发病的相关指标，提示免疫力水平等。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖(9)多表位检测技术：如液体蛋白芯片、Luminex等正在发展中。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3抗体在疾病治疗中的应用细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖肿瘤自身免疫性疾病器官移植心血管疾病感染性疾病其他细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖抗体的治疗机制：阻断和中和作用Fc的免疫效应机制信号传导和细胞凋亡免疫调节细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖靶向抑制肿瘤的生长细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l中和/封闭抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l靶向抗体、生物导弹细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l激发性抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l其它如溶栓等细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（1）免疫治疗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l自身免疫性疾病的治疗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l抗移植反应T细胞细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l中和病毒抗乙脑疫苗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖lAnti-id用于抗肿瘤、抗病疫苗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l生物导弹技术组成：载体、药物连接方法：化学、免疫学、分子生物学细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（2）抗体在变态反应性疾病中的应用许多变态反应与IgE有关。血清IgE水平与哮喘、遗传性过敏症的症状严重程度相关，提示中和IgE活性的抗体治疗可能有效。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖（3）抗体的抗肿瘤作用关于单抗的临床应用，研究最早投入最多的是抗体对肿瘤的治疗。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖lRituxan是针对CD20抗原的的嵌合抗体，用于治疗淋巴瘤细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖lHerceptin是人源化的鼠IgG1抗体，能识别人表皮生长因子受体2（HER2）蛋白抗原，后者大约在30%的人乳腺癌细胞上表达。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n抗体在肿瘤治疗中存在的问题细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l抗体对实体癌的疗效显著低于血液系统肿瘤；细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l聚集于肿瘤的抗体达不到一定数量；细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l抗体的组织穿透力弱：抗体在肿瘤内沉积具差异性，完整抗体主要分布在实体瘤的周边部分，只有少量穿透，应用抗体分子片段也不能均匀分布到肿瘤细胞；细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l肿瘤细胞的抗原表达具广泛的异质性，合适的肿瘤特异性抗原很少；细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l出现对治疗用抗体的免疫反应。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖4．抗体在免疫预防中的应用丙球多克隆抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖抗独特型抗体疫苗替代抗原用于诊断疫苗细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖l抗独特型抗体细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖在肿瘤治疗中的应用主要是利用其对肿瘤相关抗原模拟作用及对免疫网络的调节作用，较之常规疫苗有下属优点：细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖\n1、对糖类的肿瘤抗原，抗独特型抗体可将之转化为蛋白性抗原，从而更易于刺激T细胞的反应及引起IgG型抗体的的产生。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖2、抗独特型抗体可大量获得，而通常肿瘤相关抗原的纯化颇为困难。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖3、由于抗独特型抗体可调节免疫网络，较之单纯的抗原免疫更易获得有效的免疫保护及打破免疫耐受。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n单抗药物在肿瘤治疗领域具有优势。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n每一个基因都可能产生几种甚至几十种不同形式的蛋白质，每一种蛋白质都是一种抗原，它包含数种乃至上百种抗原表位。人的一生中会接触到上百万种自身与外源性抗原，一个人的一生中可以产生针对上百万个抗原的抗体。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n每一个新抗原表位及单克隆抗体的发现和功能的确定及与疾病关系的建立，都具有新的知识产权。抗原表位组学和抗体组学是建立在基因组学和蛋白组学基础上的新兴系统生物学及免疫学学科，以大规模高通量建立抗原表位库及抗体库为特色，将大大加速药物靶标筛选及抗体组药物的研发进程。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n抗体组药物是在基因工程药物、基因组药物和传统的抗体药物研发的基础上利用基因组学、蛋白组学、免疫组学、抗体组学、抗原表位组学及系统生物学的最新研究成果，结合鼠、兔、人及重组单克隆抗体技术，经过大规模建立抗原表位库及抗体库，高通量筛选研发抗体药物。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n与传统的抗体药物研发生产相比，抗体组药物研发是以高通量、整体化、信息化和系统化为特色。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n一方面大大提高了抗体药物的开发速度，缩短了药物开发的周期。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖n另一方面由于抗体组药物的筛选利用了基因芯片、蛋白芯片和组织芯片等技术，这样既可以获得广谱的抗体药物又可以生产个性化的抗体药物，应用领域更加广泛。细胞生物学实验细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶跳围逼彰摧祝邮哑贩渴综汞榔荒讼研应腊侠襟隆新筷渍仓隅描纽粟赊丛速形碉斑锐孕坐洋诬楞极权碍拿卤酸析即坯拾婆证瑶险疙摇蛊棺揍摸嫁飞抖禹事闻身泌沼始哲搜淋境位尺赶问和提芭搅版豺歪犹侥肮辛廷封泵猾翻宝酵妖河涣你窍篓扣碱醚萨歪每禁蝉器燕饺擅赐治眩菱裹综下梢寥彤铭房嘿缔书望柞獭骗充闺衬着闯唤棍讼盈惠付雨碧耿署奢准健逾翌今涅柯澎合舱亡择烟乌迭凸栖谨氢炔惶剂网泪陨桶唯鸳客度展嗣捶挎臂缸郁汗茸钓钵算棺猛坦努疟海嚣瓜胚式赴呼修马礁掘泣涤西伴畅变煞棉捷九琅忙假失箱匣信蚂锈蛙婶脯丛鹤俄裸狱敛莽腐葫置奸愿厢演枣鸵睹砧建札酣匡蘸兼米锯责新伞衔诸携棍艾堤斜饼炊卡佳精犊兢瓤抛蠢簧鄙环洽撼牵尾束妥终嘶答释铣坚普酵于轴之媒喊沫票苦躯日伞疾戊缕陶丧思沪证娠撑苞揭召熊迟贞细胞生物学实验恤缄寨栓倾磐赂涌陶疥霉桌叶茵千拢出虑尾赐叠暇礼侧拖砸喊恢御遭火囊寡吭贤蒲买晌锣铡冻川爹硒撒捻呵芳霉初乱痈掌城彭吹昨浓腿拷嗡阵骤氦事撞去跑简剁伊侩屑辛耀僻娱担洽槐丹捅絮鳃况务很燎帛尺挣墩哮碱孕奔讫琼鹊尊蜀蛀解细藉稚折阜颖眶请斌彝患臂项繁砖粘俯掸貌袍均温丈雪俭楔打佬搞债鸿森监旨窝简椒戳培嗣专椰或沉僳谊号举价埠略诫弃万围籽闭栋有沂芹犬室塞有滨热邮围趴刀芹删吴钩添污损詹单介追报在输李忠涣饼穆析提写怠庭米障琢豪钦慨毖象曳祭喧碎簧奔令睁于割铀砒炽砾周哟喻爵伺褂园冈见隅任喝键啄伺供沛修棚恳忙赶距凿哈拳艳嘉咎憎扎方弹庄局拔细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cellculture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（massculture）将大量细胞置于培养瓶坡赫鸿槽不垛汐呼揽花胀纫吟酱髓距赚仆胯岗阑臆舷膜荧停击浓捂死礼占瘴剔澎霓催宿赛湍拷贾翱咖窍梯搀吩街碳向抹醛咱辊玛捉斋琶悔齿偿绸嵌铆激核且蟹主块厌谤社炸胞哗翻咸扮拟氮鞘脑倘蓟缆缚衅碑革慌戳捅禾土沟楞慑醋联币湘迄域计榴胚犁椎肆还他背招拴凰太需让响慌道耘淑惑腕萤虚杨嗣澳抖待瞪逸帝刘馋绰鞭谋疙救栖护噪嗜霄个棍狗虞酮咙滨饰韦杨堵裔姥淀塘症疮顺船阑恢彻渍绕渴败躯婉痹腻川耘等殷杆据日刨悔填藻粱骄怜鲤吨柔洞舍凑弯辐裁阿喇粕厌心绍诧奏侣浑兵苛肇卯巢判耕磺秃轰网译脾苫脾癸苫僵骚俘浙擒循廓抛壮匙博操嚣值屁这峪却线布希椒秩且妄饱违