薄层色谱标准操作规程 5页

  • 17.93 KB
  • 2021-05-14 发布

薄层色谱标准操作规程

  • 5页
  • 当前文档由用户上传发布,收益归属用户
  1. 1、本文档由用户上传,淘文库整理发布,可阅读全部内容。
  2. 2、本文档内容版权归属内容提供方,所产生的收益全部归内容提供方所有。如果您对本文有版权争议,请立即联系网站客服。
  3. 3、本文档由用户上传,本站不保证质量和数量令人满意,可能有诸多瑕疵,付费之前,请仔细阅读内容确认后进行付费下载。
  4. 网站客服QQ:403074932
依据:《GMP》与药品生产质量检验的要求 目的:建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程 范围:各种检验中薄层鉴别的操作 1.定义:薄层色谱法,系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上, 成一均匀薄层,经点样、展开与显示以后,再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对 比,用于进行药品的鉴别,杂质检查或含量测定的方法。 2.仪器与材料 2.1 展开室:可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。必要时在 展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性,但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。 2.2 玻璃板:除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。也可 用载玻片进行预试验。各种薄层板要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干。 玻璃板的质量有一定要求,厚度为2mm或3~4mm,预制板一般使用1mm的玻璃板。应 有良好的平面性,可用镜面玻璃或浮法玻璃,还应有一定的耐热性,以使在烘烤时不致破 裂。 2.3 涂布器:有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃 板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层. 2.4 点样器:玻璃毛细管 2.5 吸附剂或载体首选为硅胶 G、硅胶 GF254.硅胶 H、硅胶 HF254,其次有硅藻土、硅 藻土 G、氧化铝、氧化铝 G、微晶纤维素、微晶纤维素 F254 等。其颗粒大小,一般要求为 直径 10~40μm。其比表面积可达约 600m2/g。 由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。而且不同厂 家生产的硅胶,其质量也有差别,甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差 文 件 薄层色谱标准操作规程 编 号 SOP•09•1015 版 本 2 页码 1/4 编 制 日 期 替 代 ∕ 审 定 日 期 颁 发 质量保障部 批 准 日 期 生 效 年 1 月 20 日 发 放 质保中心 别。因此要使薄层分离的结果比较稳定,应严格控制硅胶质量。 3.薄层板的制备 薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干 燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25~0.5mm(供分析用).由 于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。 3.1 吸附剂(硅胶G)匀浆的制备 除另有规定外,将1份吸附剂和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后, 备用。一般水应少些为好,以能调制成适当的稠度,使涂层均匀一致为度,这样制成的薄层板 较紧密,分离效果好. 硅胶CMC板是取羧甲基纤维素钠粉(一般0.25%~0.75%)适量,加热煮沸溶解,放冷,备用. 铺板时取其上清液使用。 3.2 铺板 3.2.1 倾注法 取适量调制的吸附剂浆,倒入准备好的玻璃板上,用洗净玻棒涂铺成一均匀的薄层再稍 加振动,使整板薄层均匀.本法简便,但板面一致性差。 3.2.2 平铺法 在水平台面上,依次放置适量的玻璃板,另在玻璃板两边加上玻璃条做成框边(框边 的厚度稍高于中间玻璃板约 0.25~1mm),然后将吸附剂匀浆倒入中间玻璃板上,用有机玻 璃板或玻璃棒向一定方向均匀地将吸附剂刮平,再逐片轻轻振动,使整板薄层均匀.本法可 以一次平铺多块薄层板,简便易行,缺点同上,上述两种方法制成的薄层板,只适用一般定性 分离。 3.2.3 涂铺器法 取适量调制的吸附剂匀浆,倒入涂布器中,在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚 度为0.2~0.3mm),取下涂好薄层的玻璃板于室温下,置水平台上晾干,即得。 用涂布器制备薄层时涂布器移动的速度会影响薄层的厚度.移动快薄层就薄,反之则厚。因 此操作者需要熟练掌握移动的速度.此外,薄层的厚度与水的比例、匀浆稠度等有关。本法 可一次铺成几块薄层板,且分离效果和重现性好,可用于定量分离。 3.3 薄层的干燥(活化) 涂布好的薄层板应先平置于室温晾干,然后再在 110℃烘 0.5h.立即置有干燥剂的干燥 箱中,备用.使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。 涂布后的薄层不可立即进行干燥,否则表面易产生凹点.烘干的温度和时间对薄层板的 活度有关,应严格控制.烘好的薄层板保持时间不宜太长,最好随用随制。 4.检定方法 4.1 点样 用点样器(一般用平头微量注射器)点样于薄层板上,速度应平稳,点样原点的大小对最后 色点面积影响较大,必须减少原点样品向深层扩散,使原点集中,一般为圆点,直径 2~4mm 的范 围,可根据各品种的点样量进行选择,防止造成原点"超载"或使展开时产生"绕行"现象,会使斑 点拖尾或重叠.点样量一般不超过 10μL(在空气中点样以不超过 10min 为宜).点样基线距底边 约 2.0cm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为度.点样时必需注意勿损伤薄层表面。 4.2 展开 4.2.1 展开室如需预先用展开剂饱和,可在室中加入足够量的展开剂,并在壁上贴二条与 室一样高、宽的滤纸条,一端浸入展开剂中,密封展开室的盖,使系统平衡。 4.2.2 由于对饱和的要求不同,如有的需用展开剂将展开室饱和,有的需将薄层板置展 开室中先一并用展开剂饱和,有的需先用一种溶剂饱和后,再用展开剂展开,有的可不必饱和 等,故需按各品种要求操作,避免产生"边缘效应"。 4.2.3 将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5~1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中),密封室盖,待展开至规定距离(一般为10~15cm),取出 薄层板,晾干,按各品种项下的规定检测。 4.2.4 常用上行法展开,此外,也可使用下行展开法,径向展开法、单向多次展开法、双向 展开法等。 4.3 显色 展开后的薄层板须将溶剂挥尽后,按各品种项下规定条件显色.但本法可采用具腐蚀性 试剂如硫酸等喷雾显色.无粘合剂薄层板,宜采用湿态显色等.所用喷雾器应不为试液腐蚀并 能将试液均匀喷雾。 5.结果判定: 除另有规定外,薄层色谱法鉴别可在薄层板上进行对比的方法.供试品在色谱中所显主 斑点的颜色(或荧光)与位置,应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。