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- 2021-09-24 发布
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专题 2微生物的培养与应用
课题 1 微生物的实验室培养
课后篇巩固提升
基础知识巩固
1.以下关于无菌技术的叙述,错误的是( )
A.对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌
B.将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌
C.为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行
D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
解析对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒处理,A项错误;用于微生物培养的培养皿、
接种用具和培养基都应进行灭菌操作,B项正确;实验过程中为了避免周围环境中微生物的污染,
实验操作应在酒精灯火焰附近进行,C项正确;实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周
围物品相接触,D项正确。
答案 A
2.煮沸消毒法与巴氏消毒法的主要区别是( )
A.温度不同
B.时间不同
C.前者适用于固体消毒,后者适用于液体消毒
D.没有区别
解析煮沸消毒法是指在 100 ℃条件下煮沸 5~6 min,而巴氏消毒法则是在 70~75 ℃条件下煮 30
min或在 80 ℃条件下煮 15 min,二者的关键区别是温度不同。
答案 A
3.细菌培养基常在 121 ℃高压蒸汽灭菌锅中灭菌。如果只是在 100 ℃温度下将细菌培养基灭
菌,下列生物仍会存活的是( )
A.大肠杆菌 B.一种青霉菌
C.枯草芽孢杆菌的芽孢 D.沙门氏菌
解析芽孢是细菌为了抵御外界不良环境而形成的一种休眠体,100 ℃的温度不能将其杀死。
答案 C
4.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( )
A.一个细菌、液体培养基
B.许多细菌、液体培养基
C.一个细菌、固体培养基
D.许多细菌、固体培养基
解析菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,肉眼
可见。由一个细菌形成的菌落,形态结构是一定的。由许多细菌形成的菌落,可能不会有比较标
准的形态。
答案 C
5.下列操作属于灭菌的是( )
A.接种前用火焰灼烧接种环
B.接种前用酒精擦拭双手
C.将平板倒置,放入培养箱中培养
D.接种在酒精灯的火焰旁完成
解析 A属于灭菌,B属于消毒,C、D都是实验操作过程中防止杂菌污染的措施,与灭菌无关。
答案 A
6.稀释涂布平板法是微生物培养中常用的一种接种方法。下列相关叙述错误的是( )
A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释
B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格的灭菌处理
解析若菌液浓度过大,形成的菌落连在一起,则得不到单个的菌落。
答案 C
7.为了保持菌种的纯净,需要进行菌种的保藏,下列有关叙述不正确的是( )
A.对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法
B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上
C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异
D.对于需要长期保存的菌种,可以采用低温-4 ℃保藏的方法
解析对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法,保存于-20 ℃的冷冻箱中。
答案 D
8.下表是某微生物培养基成分,请据此回答下列问题。
编
号
成分 含量
① 粉状硫 10 g
② (NH4)2SO40.4 g
③ K2HPO4 4.0 g
④ MgSO4 9.25 g
⑤ FeSO4 0.5 g
⑥ CaCl2 0.5 g
⑦ H2O
100
mL
(1)上表培养基可培养的微生物类型是 。
(2)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于培养 。
(3)表中营养成分共有 类。
(4)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是 。
(5)若上表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是 。
解析(1)由题表可知,该培养基中没有碳源,说明培养的微生物是从外界环境中获取碳源的,因此
培养的微生物是自养型微生物。
(2)该培养基若加入(CH2O),培养基中就有了碳源,但除去成分②,培养基中就没有了氮源,该
培养基就只能用于培养固氮微生物。
(3)题表中的营养物质有水、无机盐、无机氮源三类,缺乏碳源和特殊营养物质。
(4)微生物生长需要一定的 pH,所以培养基分装前需要调节 pH。
(5)该培养基中无凝固剂,为液体培养基。菌种的纯化和鉴定通常利用固体平板培养基以获
得单细胞菌落,因此需要加入凝固剂,如琼脂,将液体培养基转变成固体培养基。
答案(1)自养型微生物 (2)固氮微生物 (3)3 (4)调节 pH (5)琼脂(或凝固剂)
能力素养提升
9.利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌,经培养后发现培养基上出现了多种菌的菌落,不可能的
原因是( )
A.培养基制备过程中被杂菌污染
B.接种过程中,无菌操作不符合要求
C.系列稀释时,无菌操作不符合要求
D.由大肠杆菌的种类不同造成的
解析大肠杆菌培养基中出现了多种菌的菌落,说明被杂菌污染了,杂菌可能来自培养基,也可能
是因为操作过程中无菌操作不符合要求。
答案 D
10.下列关于倒平板及对菌种纯化的说法,正确的是( )
A.倒平板时左手将灭过菌的培养皿盖完全打开,右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿(10~20 mL),
左手立即盖上培养皿盖
B.使用已灭菌的接种环及培养基之后不需要再灭菌
C.平板冷凝后要将平板倒置,以防皿盖上的冷凝水流入培养基
D.涂布器用火焰灼烧灭菌
解析倒平板时用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,而不是直接将盖完全
打开;使用灭过菌的接种环及培养基之后仍需进行灭菌处理,以免污染环境或感染操作者;涂布
器灭菌时需沾少量酒精引燃。
答案 C
11.在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题。
(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具 (填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中
进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点
是 。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能 。在照射
前,适量喷洒 ,可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过 (填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能
的原因是 。
解析(1)玻璃和金属材质的实验器具可以通过干热灭菌的方法来灭菌。
(2)巴氏消毒法是在70~75 ℃下煮30 min或在80 ℃下煮15 min,可以杀死牛奶中的微生物,
并使牛奶的营养成分不被破坏;高温瞬时消毒是在较短的时间内利用高温杀死微生物,由于时
间较短,营养物质损失较少。
(3)紫外线能破坏 DNA结构,有消毒、灭菌的作用,在照射前,适量喷洒消毒液,可以强化消毒
效果。
(4)自来水消毒通常采用“氯气”或“紫外线”等方法。
(5)使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,但没有达到相应温度,最可能的原因是锅
内冷空气没有排尽。
答案(1)可以
(2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少
(3)破坏 DNA结构 消毒液
(4)氯气
(5)未将锅内冷空气排尽
12.下面是有关微生物的培养与应用的问题,请分析作答。
(1)图中是利用 法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步 分散到培养
基的表面。为达到这一目的,操作上应注意
(答出一点即可)。
(2)菌落形成的根本原因是 。将乳酸菌接种到彻底灭菌的
固体培养基上,要使其正常生长必须给予的条件是 。
(3)纯化菌株时,通常使用的划线工具是 。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划
线上都不间断地长满了菌,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划
线无菌落可能的操作失误
有 。
解析(1)根据图示可知,图中利用的是平板划线法接种。操作时应注意每次划线前要灼烧接种环,
冷却后从上一区划线末端开始划,首尾区不重叠等。(2)乳酸菌是厌氧菌,要在无氧条件下培养。
(3)纯化菌株时,通常用接种环进行划线操作;第二区域划第一条线时,接种环灼烧后未冷却,致使
所划第一条线上无菌落。若第二区域划第一条线时未从第一区域末端开始,则也会导致第二划
线区域第一条线上无菌落。
答案(1)平板划线 稀释 ①每次划线前要灼烧接种环;②冷却后从上一区划线末端开始划线;
③首尾区不重叠(答出其中一点即可) (2)由单个细菌繁殖成为群体 无氧条件 (3)接种环
①接种环灼烧后未冷却;②划线未从第一区域末端开始
13.下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表,据此回答下列问题。
成
分
牛肉膏
/g
蛋白胨
/g
NaCl/g蒸馏水
含
量
0.5 1 0.5
加蒸馏水
定
容至 100
mL
(1)蛋白胨在培养基中的主要作用是
。
(2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基,还需添加的成分是 。
(3)从配制培养基直到培养完成,所采用的预防杂菌污染的方法有
(答出三点即可)。
(4)在培养基凝固前要搁置斜面,其目的是
。
解析蛋白胨中有大量的蛋白质水解而成的多肽类等物质,在培养基中提供碳源、氮源和生长因
子。微生物菌落的形成是在固体培养基上,所以此培养基还需加琼脂。
答案(1)提供碳源和氮源 (2)琼脂 (3)高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精擦手、在火焰旁接种
等 (4)扩大接种面积
14.空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气
中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:
①配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);
②制作无菌平板;
③设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;
④将各组平板置于 37 ℃恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题:
(1)该培养基中微生物所需的氮来源于 。若要完成步骤②,
该培养基中的成分 X通常是 。
(2)步骤③中,实验组的操作
是
。
(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为 36个/平板,而空白对照组的一个平板上出
现了 6个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了 现象。若将 30(即 36-6)个/平
板作为本组菌落数的平均值,该做法 (填“正确”或“不正确”)。
解析本题考查微生物的培养。解题的切入点是微生物的培养基的成分和制作及菌落的计数。(1)
培养基中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源也提供了氮源。微生物培养所采用
的培养基是固体培养基,故题中 X应是琼脂,在培养基中起凝固剂的作用。(2)本实验是为了了解
教室不同高度空气中微生物的分布情况,所以应选择不同的高度放置平板,并使之暴露在空气
中一段时间(各组时间相同),以利于空气中微生物沉附在平板上。(3)空白对照实验的设计是不
暴露在空气中,不应出现菌落,若出现了菌落说明在此次实验中平板被污染。用实验组获取的菌
落的平均值减去污染产生的菌落数,作为实验的结果,这种做法不正确,应在防止污染的情况下
重新实验,以获得较准确的数据。
答案(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂 (2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴
露相同的一段时间 (3)污染 不正确
15.回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是 (填“蛋白胨”“葡萄糖”或
“NaNO3”)。通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的 pH,其原因
是 。硝化细菌在没有碳源的培养基上
(填“能够”或“不能”)生长,原因是 。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板 (填“倒置”或“正置”)。
(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步
区分不同种的微生物,原因
是
。
(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过 处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的
微生物。
解析本题以细菌培养为依托,考查处理实验材料的能力和环境保护意识。
(1)能同时提供碳源、氮源的成分必须同时含有碳和氮两种元素,蛋白胨、葡萄糖和 NaNO3
中,只有蛋白胨同时含有这两种元素。不同细菌生长繁殖所需的最适 pH不同,所以在配制培养
基时,在各种成分溶化后分装前必须调节 pH。硝化细菌能够进行化能合成作用,即能够利用化学
反应产生的化学能固定外界的 CO2,所以能够在没有碳源的培养基上生长。
(2)用平板培养细菌时,为防止培养基冷凝后形成的水滴滴落在培养基上污染培养基,要将
平板倒置。
(3)通常根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步区分不同种的微生物,因为不同微生物的
菌落的形状、大小、颜色、凹凸情况等不同,且在一定的培养条件下微生物的菌落特征是稳定
的。
(4)为防止污染环境,使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理,这种处理可以杀死丢弃物
中所有的微生物。
答案(1)蛋白胨 不同细菌生长繁殖所需的最适 pH不同 能够 硝化细菌可以利用空气中的
CO2作为碳源
(2)倒置
(3)在一定的培养条件下,不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征
(4)灭菌