新步步高高考生物一轮复习 加试特训九浙科 13页

加试特训(九)‎ ‎1．请回答下列有关微生物的相关问题。‎ 资料一　微生物在现代生物技术中应用非常广泛，如酿酒制醋等。获取纯种酿酒酵母菌的基本程序是：配制培养基—接种—培养—观察记录—纯化培养。‎ ‎(1)酵母菌的培养最好使用下列哪种培养基(　　)‎ A．牛肉膏蛋白胨培养基 B．麦芽汁琼脂培养基 C．无土栽培培养基 D．MS培养基 ‎(2)采用划线分离法接种时，开始接种时要灼烧接种环，目的是____________________。要把接种后的培养基和一个未接种的培养基同时放入恒温箱培养，设置“未接种的培养基”的目的是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎(3)如果将分离出来的纯种酿酒酵母接种到葡萄汁中发酵，如何获得酒精含量更高的果酒？‎ ‎________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎(4)把从酵母细胞中提取的淀粉酶固定在尼龙布上制成固定化酶，与传统酶应用技术相比，此技术最显著的优点是__________________________________________。‎ ‎(5)某实验小组欲按上述方法从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，应将菌液涂布接种于以____________为唯一碳源的固体培养基上，‎30 ℃‎条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈__________状态放置；筛选时应将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是出现透明圈，则说明此种菌能够______________________________________。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用__________法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。‎ 资料二　基因工程中常选用一些微生物作为工程菌，下图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图。‎ ‎(6)a代表的物质和质粒的化学本质相同，都是________________，二者还具有其他共同点，如①____________，②________________(写出两条即可)。‎ ‎(7)若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因的切割末端应为____________________；可使用__________________________把质粒和目的基因连接在一起。‎ ‎(8)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上被称为__________________，其作用是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎(9)下列常在基因工程中用做载体的是(　　)‎ A．苏云金芽孢杆菌抗虫基因 B．土壤农杆菌环状RNA分子 C．大肠杆菌的质粒 D．动物细胞的染色体 答案　(1)B　(2)灭菌　检验培养基是否被污染 ‎(3)往葡萄汁中加入适量的蔗糖　‎ ‎(4)可重复使用(产品易纯化)‎ ‎(5)淀粉　倒置　分泌淀粉酶使淀粉发生水解　划线分离 ‎(6)DNA　能够自主复制　具有遗传效应 ‎(7)　DNA连接酶 ‎(8)标记基因　筛选到含有重组DNA分子的受体细胞　(9)C 解析　(1)“细菌喜荤，霉菌喜素”，A培养基适用于细菌培养，B培养基适用于真菌培养；C培养基适用于植物体培养，D培养基适用于植物组织培养。(2)开始接种时要对接种环灼烧灭菌，接种后的培养基和一个未接种的培养基同时放入恒温箱培养，目的是检验培养基在接种中是否被污染。(3)葡萄汁中添加蔗糖发酵能促进酵母菌快速生长，加快发酵产生酒精更多。(4)使用固定化酶的优点是酶制剂更加稳定、可以重复使用、产品易纯化等。(5)以淀粉为唯一碳源的固体培养基通常只生长能利用淀粉的微生物。培养皿在培养过程中会有冷凝水从盖上滴落到培养基上，培养皿倒置培养可以防止菌体随水滴扩散，使分离菌种失败。培养基中含淀粉遇碘液会显蓝色，若菌体能分解利用淀粉，其菌落周围会出现透明圈。通过划线分离法可以进一步分离纯化菌种。(6)a为拟核，与质粒的化学本质相同，都为DNA，均为大肠杆菌的遗传物质，可以自主复制，并具有遗传效应。(7)相同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，产生粘性末端的碱基序列互补，可以通过DNA连接酶连接。(8)质粒上的抗性基因作为标记基因，可以用于筛选含有重组DNA分子的受体细胞。(9)作为基因工程中的载体，应能够自主复制，并具有标记基因和多个限制性核酸内切酶切点。‎ ‎2．在工业生产中，α淀粉酶主要是通过固定化酶技术将其用于淀粉的分解，α淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中。请回答下列相关问题：‎ ‎(1)在上个世纪50年代，酶已经大规模地应用于各个生产领域，到了70年代又发明了固定化酶技术。固定化酶技术将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与____________________接触，又能与__________________分离，同时固定在载体上的酶还能______________________。常用的固定方法有_______________________________________________________。‎ ‎(2)“α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验中：‎ ‎①α淀粉酶固定在________上，使用了下图中方法________(填出号码及名称)。‎ ‎②实验中，用滴管滴加淀粉溶液时，使淀粉溶液以________流速过柱，目的是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎③灌注了固定化酶的注射器在使用完后要__________________________________，放置在__________________中保存。‎ ‎(3)正常大鼠体内因含有α淀粉酶基因可以正常利用淀粉。但研究发现某一突变型大鼠因体内缺少α淀粉酶基因无法利用淀粉。现科研人员通过基因改造使其可以正常利用淀粉。具体流程如下：‎ ‎①卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠____________________中获取。‎ ‎②图中的α淀粉酶基因作为________________，质粒作为____________________，二者需用____________________________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有________________________________有关。‎ ‎③子代大鼠如果__________________和________________，即可分别在分子水平和个体水平上说明α淀粉酶基因已成功表达。‎ ‎④在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是______________________、早期胚胎培养和胚胎移植。‎ 答案　(1)反应物　产物　反复利用　吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法　(2)①石英砂　乙　②0.3 mL/min　使淀粉充分与酶接触　③用10倍柱体积的蒸馏水洗涤　‎4 ℃‎冰箱　(3)①卵巢　②目的基因　载体　同一种限制性核酸内切酶　限制性核酸内切酶的切割位点　③检测到相应蛋白质(α淀粉酶)　可利用淀粉　④体外受精 解析　(1)固定化酶技术将水溶性的酶通过物理或化学的方法固定在不溶于水的载体上，使酶既能与反应物接触，又能与产物分离，酶可以重复利用。常用的固定方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法。(2)教材实验中α淀粉酶固定在图乙所示的石英砂上。为了使淀粉充分与酶接触，淀粉溶液以较慢的速度0.3 mL/min流速过柱。使用完毕的注射器要用10倍柱体积的蒸馏水洗涤后放置在‎4 ℃‎冰箱中保存。(3)①获取卵母细胞的途径有2条：从活体输卵管中采集或从已处死的雌鼠卵巢中获取。②目的基因为α淀粉酶基因，质粒为载体，两者必须用相同的限制性核酸内切酶切割，有相同的粘性末端才能连接，能被限制性核酸内切酶切割，是因为具有限制性核酸内切酶的切割位点。③如果检测到相应蛋白质(α淀粉酶)，即可在分子水平上说明目的基因已经表达，如果检测到大鼠可以利用淀粉，即可在个体水平上说明目的基因已经表达。④在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植。‎ ‎3．在我们的周围存在着各种各样的微生物，比如大肠杆菌、酵母菌、乳酸菌、霉菌等。微生物与人类的生活、健康有着密切的联系。请回答下列相关问题：‎ ‎(1)检查饮用水中大肠杆菌数量时必须进行无菌操作。实验前所需的各种器材如三角烧瓶、培养皿等需要经过____________________法灭菌。在微生物培养或分离过程中，下列操作不恰当的是________。‎ A．在超净台中进行接种时应该关闭紫外灯 B．扩大培养时必须保证氧气的供应 C．控制液体培养基中营养物质的浓度 D．空白的培养基平板需进行无菌实验 ‎(2)微生物与人类的生活关系越来越密切，在制作果酒、果醋、泡菜的过程中，用到的主要微生物分别是________________________________。在果醋、泡菜和果酒的制作过程中，均利用相应微生物的代谢特点进行条件控制，其中需要提供氧气的是________________的制作。泡菜腌制原理是________________和________________等主要微生物利用菜中的________________和其他营养物质进行发酵，产生有机酸和醇类物质。‎ ‎(3)因为培养基里面含有微生物或动植物细胞生长所必需的营养物质和成分，所以常用培养基来保存或增殖微生物或动植物细胞。‎ ‎①配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入________________________________作为营养物质，还需要考虑温度、渗透压和________________等条件。大肠杆菌培养和分离的实验中，在LB液体培养基中进行______________，培养液经________________后，在LB固体培养基上进行________________，并将培养皿________________放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。通常对获得的纯菌种可以依据________________的形状、大小等特征进行初步的鉴定。‎ ‎②根据微生物的特点，可以利用相应的培养基进行分离或培养，例如用________________________________的培养基分离能产生脲酶的微生物，用________________________的培养基培养苹果青霉，可提高果胶酶的产量。‎ ‎③利用固体培养基可以进行微生物培养和植物细胞培养，两者的培养基明显不同的是(　　)‎ A．琼脂的添加 B．有机物的添加 C．激素的添加 D．灭菌的处理 答案　(1)高压蒸汽灭菌　B　(2)酵母菌、醋化醋杆菌、乳酸菌　果醋　假丝酵母　乳酸菌　糖　(3)①蛋白胨和酵母提取物　pH　扩大培养　稀释　涂布分离　倒置　菌落　②仅以尿素为氮源　富含果胶　③C 解析　(1)无菌操作包括多种灭菌方法，对实验器皿如培养皿等采用高压蒸汽灭菌法灭菌。扩大培养一般用液体培养基，是否要通入空气要根据微生物的需求而定，不能一概而论。(2)在制作果酒、果醋、泡菜的过程中，分别用到的主要微生物是酵母菌、醋化醋杆菌和乳酸菌。果醋发酵属于需氧发酵，需要向发酵装置中通入空气。泡菜腌制原理是假丝酵母和乳酸菌等主要微生物利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，产生有机酸和醇类物质。(3)①细菌需要的营养物质主要为蛋白胨、酵母提取物等。培养基配制除考虑营养物质、温度、渗透压等之外还要特别注意pH适宜。通常液体培养基用于菌种扩大培养或生产，固体培养基用于研究鉴定和菌种分离，菌种分离常用划线分离和涂布分离，其中涂布分离前常常需要稀释样品。接种后的培养皿应倒置培养，避免培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基上，造成菌体随水滴扩散，不能获得单菌落。固体培养基上生长的微生物能形成菌落，菌落的形状、大小、颜色、软硬等特征可用于菌种的鉴定。②分离能产生脲酶的微生物应用以尿素为唯一氮源的培养基。培养苹果青霉获得大量果胶酶时应用含果胶丰富的培养基。③植物组织培养的培养基中必须加入植物激素作为生长调节物质才能完成，有机物的需求较少但不能缺少，而一般微生物培养时不需要激素添加，有机物较多。‎ ‎4．人参果果实有淡雅的清香，果肉清爽多汁，风味独特。具有高蛋白、低糖、低脂，还富含维生素C，以及多种人体所必需的微量元素，尤其是硒、钙的含量大大地高于其他的果实和蔬菜。某兴趣小组将人参果制成果酒，并尝试将其口感欠佳的叶子制作泡菜。请回答下列相关问题：‎ ‎(1)下图为人参果果酒生产工艺流程简图，据图回答问题：‎ 选料→“？”→粉碎→灭菌→接种→发酵→“？”→果酒 ‎①流程中“？”处的内容依次应为________、________。‎ ‎②制作果酒时，温度应该控制在____________________，果酒酿造过程中如果果汁灭菌不合格，含有醋化醋杆菌，在酒精发酵旺盛时，醋化醋杆菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎③果酒制作离不开酵母菌，与醋化醋杆菌相比，酵母菌在结构上的主要特点是________________________________________________________________________。‎ ‎④人参果果酒制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，目的是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎(2)下图是人参果叶子的腌制及亚硝酸盐含量测定的实验流程示意图，请据图回答：‎ ‎①制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是__________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ 泡菜腌制过程中起主要作用的菌种是______________________________________‎ ‎______________________。‎ ‎②在制作泡菜的过程中，因为操作不当，造成泡菜腐烂。下列原因中正确的是(　　)‎ A．罐口密闭缺氧，抑制了乳酸菌和需氧腐生细菌的生长繁殖 B．罐口密闭不严，氧气使乳酸菌的生长繁殖受到抑制，需氧腐生细菌的生长繁殖加快 C．罐口密闭不严，氧气使酵母菌和需氧腐生细菌的生长繁殖减慢 D．罐口密闭缺氧，促进了乳酸菌和需氧腐生细菌的生长繁殖 ‎③测定亚硝酸盐含量的方法是________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ 亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，反应产物再与N－1－萘基乙二胺偶联，形成______________色产物。绘制标准曲线时，应以亚硝酸钠质量为横坐标，以________________为纵坐标。‎ ‎④三坛泡菜分别在腌制过程中的第3、5、7、9、11、13天分别对食盐浓度为4%、6%、8%的泡菜做了亚硝酸盐含量的检测，得到以下数据：‎ 食盐浓度 发酵天数　　　‎ ‎1号坛4%‎ ‎2号坛6%‎ ‎3号坛8%‎ 第3天 ‎1.6‎ ‎1.2‎ ‎0.5‎ 第5天 ‎3.2‎ ‎5.5‎ ‎2‎ 第7天 ‎3.8‎ ‎4.0‎ ‎1.8‎ 第9天 ‎3.5‎ ‎1.8‎ ‎1.6‎ 第11天 ‎3.4‎ ‎1.2‎ ‎1.5‎ 第13天 ‎3.2‎ ‎1.2‎ ‎1.2‎ 请根据表中数据，对泡菜的制作提出两条建议________________________________、________________________________________。‎ ‎(3)科学家将分离得到的人参果韧皮部细胞进行克隆，最终由单个细胞发育成了完整的新人参果植株。具体操作步骤如下所示：‎ 科学家所用的这种植物克隆技术叫做______________。该项技术表明，当植物细胞处于____________________状态时，在一定的营养物质、________________________和其他外界条件的作用下，可能表现出________________________，发育成完整植株。‎ 答案　(1)①冲洗　过滤　②25～30 ℃　不能　因醋化醋杆菌是好氧型细菌，而果酒发酵是无氧环境(或因醋化醋杆菌需要在有氧且温度是30～35 ℃条件下，才能将糖转化为醋酸，而此时发酵罐中的条件是无氧且温度是25～30 ℃)　③有成形的细胞核　④在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量 ‎(2)①亚硝酸盐的含量低　假丝酵母和乳酸菌　②B　③光电比色法　紫红　光密度值　④泡菜腌制时间最好长于13天　适当地增加食盐的浓度 ‎(3)(植物)组织培养　离体　(植物)激素　细胞的全能性 解析　(1)①果酒生产的工艺流程为：选料→冲洗→粉碎→灭菌→接种→发酵→过滤→果酒。②醋化醋杆菌的最适生长温度为30～35 ℃。如果果汁灭菌不合格，含有醋化醋杆菌，由于果酒发酵旺盛时是无氧环境，且温度为25～30‎ ‎ ℃，不适合醋化醋杆菌生存，故醋化醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸。③醋化醋杆菌是原核生物，无细胞核，酵母菌是真核生物，有细胞核及多种细胞器。④果酒制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量，有利于后期发酵。(2)①制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜是因为其中亚硝酸盐的含量低，蔬菜中的氮元素会被微生物分解产生亚硝酸盐。泡菜腌制过程中起主要作用的菌种是假丝酵母和乳酸菌，先期发酵以假丝酵母为主，以后发酵以乳酸菌为主。②在制作泡菜的过程中，罐口密闭不严，氧气使乳酸菌的生长繁殖受到抑制，需氧腐生细菌的生长繁殖加快，造成泡菜腐烂。③测定亚硝酸盐含量的方法是光电比色法，亚硝酸盐可与显色剂反应产生紫红色物质。绘制标准曲线时，应以标准溶液中亚硝酸钠质量为横坐标，以光密度值为纵坐标。④分析表中数据可以发现，泡菜中亚硝酸盐的含量随时间延长，先增加，13天后开始下降；泡菜中亚硝酸盐的含量还与使用盐水浓度有关，盐水浓度适当增大亚硝酸盐的含量相对减少。(3)由图可知，为植物组织培养过程，A为离体培养，B为脱分化形成愈伤组织，C为再分化形成胚状体，D表示胚状体经过有丝分裂发育成幼苗，E为幼苗成长为植株。植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。‎ ‎5．如图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计生产破伤风杆菌抗体的实验方案。请据图回答问题。‎ ‎(1)该方案的目的是__________________。该方案能达到预期效果吗？________________。原因是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎(2)图中②为________________________________过程，常用___________________作为诱导剂。该细胞继承了__________________________________，因此，不仅能______________________，还能产生______________________________________。图中③进行细胞培养的目的是____________________________________。‎ 图中⑤的培养能获得______________________________细胞，便于大规模培养。‎ ‎(3)在制备破伤风杆菌抗体的过程中，进行了两次筛选，其目的是不相同的，②是通过筛选获得________________________，④是通过筛选获得_______________________________。‎ ‎(4)破伤风杆菌的抗体最终可从____________________和________________________中提取。‎ ‎(5)破伤风杆菌是原核生物，可归为微生物。一般而言，为了获得纯净的微生物培养物，最为关键的是无菌操作。下列有关无菌操作的叙述中，错误的是(　　)‎ A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 B．将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 答案　(1)制备单克隆抗体　不能　没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞　(2)细胞融合和筛选　灭活的病毒　双亲细胞的遗传物质　大量繁殖　特异性抗体　在体外条件下使杂交瘤细胞大量增殖　足够量产生特定抗体的杂交瘤　(3)杂交瘤细胞　产生特定抗体的杂交瘤细胞　(4)细胞培养液　小鼠腹水　(5)A 解析　(1)由图示的程序图可知，该方案的目的是制备单克隆抗体。B淋巴细胞有以下特点：①在体外不能无限增殖；②只有受到抗原刺激后才能产生相应抗体；③与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞后既可无限增殖，又能产生大量所需抗体。所以单克隆抗体制备过程首先需要注射与生产单克隆抗体发生特异性免疫反应的抗原，否则小鼠体内不会发生特异性免疫反应，产生合成所需抗体的B淋巴细胞。(2)获得B淋巴细胞后，因为B淋巴细胞不能大量增殖，虽能产生抗体，但数量有限，因此需要与骨髓瘤细胞融合，融合必须在诱导剂的诱导下才能发生，常用的是灭活的病毒。两细胞融合有三种类型：B淋巴细胞—B淋巴细胞，骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞，B淋巴细胞—骨髓瘤细胞，我们需要的是杂种细胞，它结合了双亲的遗传物质，具备大量增殖和产生抗体的能力，所以需培养筛选。单克隆抗体生产中，经筛选获得的杂交瘤细胞需要体外培养获得大量的克隆细胞。图中⑤的培养能获得足量的杂交瘤细胞。(3)第一次筛选是选择需要的杂交瘤细胞，第二次筛选是在杂交瘤细胞中选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。(4)获得的杂交瘤细胞需转移到体外培养液中或小鼠腹腔中生产大量的单克隆抗体。(5)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒而不是灭菌。‎ ‎6．回答下列有关微生物和动植物细胞培养的问题：‎ ‎(1)下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：‎ 试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 ‎5 g ‎10 g ‎5 g ‎20 g ‎1 000 mL ‎①培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、______________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行______________处理。该培养基从物理性质上分类属于_________。‎ ‎②分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________________________和________。‎ ‎③假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？______________、________________________________(列举两项)。‎ ‎(2)动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。如图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图，请回答下列问题：‎ 肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞________________________________。气室中充入5%CO2，气体的主要作用是________________________________。培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素的________________________________，以保证抗生素对肝脏无害。图中培养过程所用的培养基与植物组织培养基成分的主要不同是________________________________________________________________________。‎ ‎(3)植物组织培养过程中对植物样本进行消毒，可将植物样本先放入70%酒精中浸泡10 min，再放入5%________________________溶液中浸泡5 min，并重复一次，最后用无菌水冲洗。培养基除了含有必需的营养物质和凝固物质外，还必须加入____________________________。消毒后的植物样本要先后培养在________________培养基和____________________培养基中，在合适条件下可培养得到幼苗。幼苗在定植前需经过一段时间的锻炼，即逐渐降低幼苗生活环境中的________________________________，以使幼苗能适应自然环境。‎ 答案　(1)①氮源　牛肉膏和蛋白胨　灭菌　固体培养基　②划线分离法　涂布分离法　③稀释倍数不够，菌液的浓度太高　划线时或划完第一次没有灭菌即接着划第二次　培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染(任选两项)‎ ‎(2)吸收氧气和营养物质、排出代谢废物　维持培养液适宜的pH　种类和剂量　动物细胞培养基中必须含有血清等　(3)次氯酸钠　植物激素　发芽(生芽)　生根(顺序不能错)　湿度 解析　(1)①培养基中都应含有水、无机盐、碳源、氮源。配制培养基时加入了琼脂，因此该培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。②分离纯化微生物一般用划线分离法和涂布分离法。③划线分离法中每次划线前都要将接种环灼烧灭菌，以杀死上次划线时接种环上残留的菌种；采用涂布分离法时稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。(2)把肝脏切成小薄片，有利于肝脏细胞的呼吸代谢，即吸收氧气和营养物质、排出代谢废物。气室中充入5%CO2的作用是形成碳酸来维持培养液适宜的pH。同时也要注意选择抗生素的种类和数量来抑制细菌生长。动物细胞培养过程中为保证顺利增殖，培养基中一般要加入血清等。(3)植物组织培养中对外植体的消毒过程为放入70%酒精中浸泡10 min，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5 min，并重复一次，最后用无菌水冲洗。植物组织培养基中除含有必需的营养物质和凝固物质外，还必须加入植物激素作为生长调节物质。植物组织培养快速繁殖的一般程序是先诱导生芽得丛状苗，后诱导生根得试管苗，故培养时先用生芽培养基后用生根培养基。试管苗的生活环境与自然环境相差很大，光照弱湿度大且恒温，因此在试管苗移栽前要炼苗，主要是逐渐减少湿度、增强光照和变温等，其中减少湿度最关键。‎ ‎7．干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，每升人血只能提取0.5 μg，所以价格昂贵。现在某一基因公司用下图所示的方式生产干扰素。请回答下列有关基因工程和酵母菌的相关问题：‎ ‎(1)干扰素基因在基因工程中称为__________________。用________________________技术可使获得的基因迅速扩增。此基因与细菌的质粒结合，形成重组DNA分子要用________________________________处理基因和质粒特定核苷酸之间的______________________________，使两者露出相同的粘性末端，再用________________将二者连接成重组DNA分子，然后将其导入酵母菌体内。酵母菌在基因工程中称为________________________________________________________________________。‎ ‎(2)科学家在培养转基因植物时，常用________________________中的质粒做载体。‎ ‎(3)分离纯化所需受体酵母菌时可采用下图所示两种方法，图B的分离方法是____________________。利用获得的突变酵母菌和葡萄汁进行酒精发酵实验，发酵过程中下列方法不能防止杂菌入侵的是(　　)‎ A．弯曲玻璃管中加水封口 B．发酵液中添加某种抑制物如抗菌素 C．发酵过程必须保证所有用具都是清洁的 D．人工接种发酵的葡萄需经高锰酸钾浸泡消毒 答案　(1)目的基因　PCR　同种限制性核酸内切酶　磷酸二酯键　DNA连接酶　受体细胞　(2)农杆菌　(3)涂布分离法　B 解析　(1)干扰素基因作为目的基因，可用PCR技术扩增。形成重组DNA分子时要用到的工具有限制性核酸内切酶、DNA连接酶、基因进入受体细胞的载体。(2)培育转基因植物时常用农杆菌做载体。(3)分离纯化微生物有涂布分离和划线分离法两种，B属于涂布分离法。在酒精发酵过程中需防止杂菌入侵，方法有许多，如弯曲导气玻璃管中加水封口，发酵过程必须保证所有用具都是清洁的，人工接种发酵的葡萄需经高锰酸钾浸泡消毒等，但发酵液中添加抗菌素只能抑制部分细菌生长，不能抑制其他微生物如霉菌的生长。‎ ‎8．果胶酶基因广泛存在于各种微生物中，如细菌、真菌和放线菌中。某一科研机构通过转基因技术将黑曲霉菌中的果胶酶基因转入到奶牛体内，培育出可产生果胶酶的转基因奶牛。请据图回答下列问题：‎ ‎(1)图中b、c指的生物工程技术名称________________________________、_______________；外源基因是指____________________。D与亲本A、B牛的最根本区别是______________。‎ ‎(2)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________________________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________________________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是________________。‎ ‎(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ 检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用____________________期的细胞用显微镜进行观察。‎ ‎(4)为了检测转基因奶牛产生的果胶酶活性是否达到要求，现进行了以下实验：‎ 实验步骤如下：‎ 步骤一，制备苹果匀浆。将苹果洗净，切成小块，用榨汁机打碎成苹果匀浆。加热苹果匀浆到‎100 ℃‎，再冷却至‎50 ℃‎左右。‎ 步骤二，配制不同浓度的酶液。取5支10 mL的试管，依次编号为2～6号。分别加入不同量的质量浓度为‎10 g/L的果胶酶溶液，再分别加入苹果酸定容至10 mL，获得质量浓度分别为‎2 g/L、‎4 g/L、‎6 g/L、‎8 g/L、‎10 g/L的果胶酶溶液，备用。‎ 步骤三，降解苹果匀浆(如下图所示)。‎ 步骤四，沉淀。向上述6只烧杯中添加明胶、活性炭等物质搅拌处理，充分混匀后静置，分别过滤。‎ 记录并处理结果：用量筒测量澄清滤液(即苹果汁)的体积，记入表格，并计算出汁率。请回答下列问题：‎ ‎①果胶酶能提高苹果的出汁率并使果汁澄清的原理是：‎ ‎________________________________________________________________________‎ ‎________________________________________________________________________。‎ ‎②步骤一中，将苹果匀浆加热到‎100 ℃‎的目的是________________________________。步骤二中，在2～6号试管中加入‎10 g/L果胶酶溶液的量分别是___________________________；步骤三中，在1号烧杯中加入1 mL________________。‎ 答案　(1)转基因技术　胚胎移植技术　果胶酶基因　D牛基因组中含有外源基因 ‎(2)相互接触　接触抑制　单层(或一层)‎ ‎(3)由于活细胞的细胞膜具有选择透性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色(或由于死细胞的细胞膜丧失了选择透性，大分子染料能够进入死细胞内进行着色)　有丝分裂中 ‎(4)①果胶酶能分解果胶，瓦解细胞壁及胞间层 ‎②使苹果中的酶失活，防止干扰实验结果　2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL　苹果酸 解析　(1)b、c分别是指转基因技术和胚胎移植技术；果胶酶基因是外源基因，E是指带有外源基因的受精卵。D与亲本A、B牛的最根本区别是D牛基因组中含有外源基因。(2)在动物细胞培养过程中，细胞会表现出接触抑制现象，此时是单层细胞。(3)由于活细胞的细胞膜具选择透性，大分子染料不能进入活细胞内，而死细胞的细胞膜丧失选择透性，大分子染料能够进入死细胞内而着色。由于有丝分裂中期染色体形态固定、数目清晰，因此最好选用有丝分裂中期的细胞观察染色体数目。(4)①果胶酶能分解果胶，瓦解植物细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易，也使浑浊的果汁变得澄清。②在研究酶浓度对出汁率影响的实验中，加热使苹果中的酶失活，可排除苹果中的酶对实验结果的影响。1号烧杯做空白对照，2～6号烧杯中加入等浓度梯度的酶溶液。在一定浓度范围内，随酶浓度的增加，出汁率增加，超过一定范围后，出汁率不再变化。‎