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  • 2021-09-17 发布

版生物高考大一轮复习现代生物科技专题第讲胚胎工程北师大版

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第 34 讲 胚胎工程 第十单元 现代生物科技专题 1. 动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础 ( Ⅰ ) 。 2. 胚胎干细胞的移植 ( Ⅰ ) 。 3. 胚胎工程的应用 ( Ⅱ ) 。 [ 考纲要求 ] 考点一 生殖细胞的形成与胚胎的发育 考点二  胚胎工程实验技术 矫正易错 强记长句 重温高考 演练模拟 内容索引 课时作业 生殖细胞的形成与胚胎 的发育 考点一 1. 生殖细胞的形成 (1) 精子的发生 ① 精子的形态结构 精子结构一般都可以分为头、 和 3 部分。精子的头部主要由一个 的顶体和 的细胞核构成。顶体内含有多种与受精有关的 , 细胞核中染色体高度浓缩,含有雄性动物的 ,细胞质 。 知识梳理 中段 囊状 尾 变形 水解酶 全部遗传信息 很少 ② 精子发生的过程 a. 场所:睾丸。 b. 过程 i. 增殖期:精原细胞通过 增殖,一部分贮藏于曲细精管中继续增殖,另一部分进入生长期。 ii. 生长期:进入生长期的精原细胞 成为初级精母细胞。 iii. 成熟期:初级精母细胞进行 。 iv. 精子形成期: 中的精子一般没有受精能力,只有当精子头部的 被分解后精子才能具备受精能力 。 ③ 精子发生的激素调节:雄激素的作用主要是刺激 和 的发育与成熟,激发并维持 。 有丝分裂 连续两次分裂 长大 附睾 糖蛋白 雄性生殖器官 精子 第二性征 (2) 卵细胞的发生 ① 卵细胞的形态结构:卵细胞的细胞膜外周由内向外依次是 、 , 多, 十分丰富。 ② 卵细胞发生的过程 a. 场所:卵巢中的 。 透明带 细胞质 放射冠 核糖体 卵泡 b. 过程 i. 增殖期:哺乳动物在胚胎期完成 后,雌性胎儿的 就分化为卵原细胞。这些卵原细胞最后一次有丝分裂后发育为初级卵母细胞。初级卵母细胞进一步发育,并被卵泡细胞包围形成 。 ii. 生长期:雌性哺乳动物 以后,原始卵泡中的 细胞陆续再次进入生长发育状态,此时其细胞体积不断增大,随后进入成熟期。 iii. 成熟期:随着卵泡的成熟,卵泡内的初级卵母细胞,经减数分裂 Ⅰ 形成一个 细胞和一个很小的第一极体。对多数哺乳动物来说,次级卵母细胞继续进行减数分裂 Ⅱ ,但它停止在分裂 阶段。 性分化 原始卵泡 原始生殖细胞 性成熟 初级卵母 次级卵母 中期 ③ 卵细胞发生的激素调节:卵泡刺激素 (FSH) 可促进卵母细胞的生长和发育,并和黄体生成素 (LH) 一起使卵泡细胞释放更多的 促进卵泡生长, LH 增高会引起排卵。 雌激素 2. 胚胎的发育 (1) 受精作用 ① 含义:是 结合形成一个 的过程。 ② 场所:哺乳动物是 受精的。 ③ 过程:当精子和卵细胞接触时,精子发生 反 应,释放出水解酶,将卵细胞的透明带分解,从而进入卵细胞内。与此同时,精子接触 _______ 时,卵细胞被激活,释放出一种物质传播到卵黄表面,引起 发生改变,阻止后来的精子入卵,所以哺乳动物多是 入卵的。 两性配子 体内 新细胞合子 顶体 卵黄膜 透明带 单精子 (2) 胚胎发育的过程 ① 场所:卵细胞在 中与精子受精结合。受精卵形成后,在 _______ 中开始了有丝分裂的进程。 ② 早期胚胎发育包括 3 个阶段 a. 桑椹胚:受精卵开始进行的几次有丝分裂,较普通有丝分裂快得多,称为 。当 分裂到 个细胞时,细胞紧密连接成为一个细胞团,此时叫 。 当卵裂球内含有 2 ~ 8 个细胞时,其中的每一个细胞都具有 ,可以发育成一个完整的个体。这时的每一个细胞都可以做胚胎移植的 。 输卵管 卵裂 输卵管 卵裂球 16 ~ 32 桑椹胚 全能性 核供体 b. 囊胚:桑椹胚继续发育,细胞分泌 ,在胚胎内部形成空隙,逐渐变大成为 , 并出现细胞定位现象,一端细胞个体较大,形成密集的内细胞团;另一面只有环透明带一排细胞叫做滋养层,此时的胚胎叫囊胚。 c. 原肠胚:囊胚进一步发育,内细胞团外的 退化,内细胞团裸露形成胚盘,在胚盘的下方衍生出 ,经过变化又出现了第三个胚层,它插入到上下胚层之间,称为 。这时的胚胎叫原肠胚。 液体 滋养层 囊胚腔 内胚层 中胚层 1. 有关精、卵细胞的发生及受精的判断 (1) 精子和卵子的发生都是在胚胎期就开始的 (     ) (2) 卵子形成过程中,减数分裂 Ⅰ 和减数分裂 Ⅱ 是连续的 (     ) (3) 排卵是指卵泡从卵巢中排出 (     ) (4) 附睾中的精子一般不具有受精能力 (     ) (5) 透明带发生改变可防止多精入卵 (     ) 常考基础诊断 √ × √ × × 2. 有关早期胚胎发育的判断 (1) 卵裂球细胞的体积随分裂次数增加而不断增大 (     ) (2) 卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加 (     ) (3) 在胚胎发育过程中,细胞的分化出现在桑椹胚期 (     ) (4) 内细胞团将来发育成胎膜和胎盘 (     ) × × × × 教材热点拓展 如图表示哺乳动物发育过程的几个阶段,据图分析:   (1)A 、 B 、 C 的名称分别是什么? 提示   桑椹胚、囊胚、原肠胚。 提示 (2) 图中的 4 和 7 两个空腔是同一个结构吗? 提示  不是,分别是囊胚腔和原肠腔。 (3) 细胞分化开始出现于哪个时期? 1 部 分的细胞将来形成什么结构? 提示   细胞分化开始出现于 B( 囊胚 ) 时期, 1 部分的细胞将来形成胎膜和胎盘。 (4) 早期胚胎的发育过程中,卵裂时细胞的体积和所有的细胞体积之和有何变化? 提示   卵裂过程中,细胞只分裂而不生长,所以每个细胞的体积越来越小,但总体积并不增加或略有缩小。 提示 命题点一 精、卵细胞的发生与受精过程分析 1. 下列不是精子、卵子发生的区别的是 A. 初级精母细胞、初级卵母细胞的形成时间 B. 减数分裂 Ⅰ 和减数分裂 Ⅱ 的时间连续性 C. 成熟生殖细胞是否经过变形 D. 成熟生殖细胞中染色体的数目 命题探究 √ 答案 解析 解析   初级精母细胞的形成时间是从初情期到生殖机能衰退,初级卵母细胞的形成时间是在胚胎出现性别分化后, A 项正确; 精子形成过程中,减数分裂 Ⅰ 和减数分裂 Ⅱ 在时间上是连续的,而卵细胞形成过程中,减数分裂 Ⅰ 和减数分裂 Ⅱ 在时间上是不连续的, B 项正确; 精子的形成过程需要变形,卵细胞的形成过程不需要变形, C 项正确; 精子和卵细胞中的染色体数目相同,都是体细胞的一半, D 项错误。 2.(2018· 贵阳第一中学联考 ) 如图表示高等动物卵子的发生过程,请据图回答下列有关问题:   (1) 图中 A 是 _________ , B 是 _____ , E 是 ______ 。 答案 解析 解析   图中 ① 为卵原细胞增殖 ( 有丝分裂 ) 并演变为初级卵母细胞的过程; ③④ 为减数分裂,只有在受精时,次级卵母细胞才能最终完成减数第二次分裂,因此 E 是精子, B 是合子;阶段 C 为卵泡的形成。 第一极体 合子 精子 (2) 精子形成过程不同于卵子形成过程的最主要特征是 _________ ,该过程保留的主要结构是 _______ 和 _______ 。 解析 解析   精原细胞经过减数分裂,产生精子细胞,精子细胞需要经过变形过程才能形成精子 ( 卵子形成不需要变形 ) ,精子细胞中很多结构会消失,而细胞核和线粒体则会保留下来。 答案 需要变形 细胞核 线粒体 (3) 当观察到两个极体时,表明 ___________________ 。 解析   当观察到两个极体时,表明卵子已经完成了受精。 卵子已经完成了受精 (4) 能发生染色体的着丝点分裂的阶段是 ______ ( 填序号 ) 。 解析 解析   染色体的着丝点分裂可发生在有丝分裂后期和减数第二次分裂后期,即图中的 ①④ 。 答案 ①④ (5) 阶段 C 发生的场所是 ______ 。 解析 解析   阶段 C( 卵泡的形成 ) 发生在卵巢内。 答案 卵巢 命题点二 早期胚胎发育过程的分析 3. 下图表示高等动物的个体发育过程,下列说法正确的是   A. 图中 ① 过程表示胚胎发育, ② 过程表示胚后发育 B. 受精卵卵裂处于囊胚形成的过程中,每个细胞的体积不断增大 C. 兔子、雄鹰和眼镜蛇在个体发育过程中会出现羊膜 D. 原肠胚是进行胚胎移植的最好时期 答案 解析 √ 解析   由受精卵发育为幼体的过程是胚胎发育,由幼体发育为成体的过程是胚后发育, A 项错误; 卵裂形成的囊胚总体积基本不变,而每个细胞的体积减小, B 项错误; 兔子、雄鹰和眼镜蛇分别是哺乳类、鸟类和爬行类动物,都是真正的陆生脊椎动物,羊膜和羊水能保证其胚胎发育所需的水环境,还具有防震和保护作用, C 项正确; 原肠胚期已发生了细胞的分化,最好在早期胚胎时进行移植,如牛、羊一般在桑椹胚或囊胚阶段移植,而其他生物要在更早阶段进行, D 项错误。 4. 如图表示哺乳动物发育过程的几个阶段,请据图回答下列问题:   (1) 写出各个阶段的名称: A : _______ , B : _____ , C : _______ 。 解析 解析   图中 A 是桑椹胚, B 是囊胚, C 是原肠胚。 答案 桑椹胚  囊胚  原肠胚 (2) 写出图中各标号的名称: [2]________ , [4]_______ , [5]_______ , [7]_______ , [8]_______ 。 解析 解析   图 B 中 [1] 是滋养层, [2] 是内细胞团, [3] 是透明带, [4] 是囊胚腔;图 C 中 [5] 是外胚层, [6] 是滋养层, [7] 是原肠腔, [8] 是内胚层。 答案 内细胞团  囊胚腔  外胚层  原肠腔  内胚层 (3)A 时期的细胞具有发育上的 _____ 性, B 时期开始出现 _________ , C 时期开始出现 _________ 。 解析 解析   桑椹胚细胞具有全能性;囊胚开始出现细胞分化,已分化为滋养层细胞和内细胞团;原肠胚已有胚层分化,分化为外胚层、内胚层,在内、外胚层之间将形成中胚层。 答案 全能 细胞分化 胚层分化 (4)[2] 将来发育成 ____________ 。 解析 解析   内细胞团将发育为完整的胚胎,滋养层将发育为胎儿的胎膜和胎盘。 答案 完整的胚胎 胚胎工程实验技术 考点二 1. 人工授精和胚胎体外培养 (1) 人工授精 ① 精子的获取 a. 采精:常用人工采集的方式 。 b. 精液的保存:通常需要加入特殊的 ,并在 下保存。 知识梳理 采集精液 稀释液 低温 ② 卵细胞的获取 a. 获取场所:可以从 中采集处于不同发育时期的卵细胞,也可以从 或 内采集卵细胞。 b. 超数排卵:指人为注射外源 ,促使卵巢排出较正常情况下更多的 。 c. 采卵技术:有 和 两种方法。 卵巢 输卵管 子宫 促性腺激素 成熟卵细胞 手术采卵 ( 冲洗输卵管采卵 ) 非手术采卵 ( 子宫冲卵 ) (2) 体外授精 ① 体外培养条件:利用化学药物 ( 咖啡因、肝素等 ) 使精子达到 状态,这样才能够穿入到卵细胞内部。 ② 含义:采取雌性动物的卵细胞和雄性动物的精子,使其在 中受精。 ③ 过程:取出成熟附睾精子,放入培养液中,在 内放置 2 h ,使精子活力增强;采集成熟的卵细胞,放入含有精子的卵细胞培养液中, 6 h 后检查受精情况。 获能 试管 CO 2 培养箱 (3) 显微授精 ① 含义:是将完整精子或精核用 注入卵周隙或卵胞质,激活 并完成受精作用。 ② 优点:显微授精过程不受精子的 、 等因素的影响。 (4) 胚胎体外培养 ① 含义:胚胎体外培养是应用 的环境,对获取的早期胚胎进行体外培养。 ② 要求:进行胚胎体外培养时,必须配制 ,培养不同发育时期的胚胎。 显微操作仪 卵母细胞 数量 活力 人工创造 一系列含有不同成分的培养液 2. 胚胎移植技术 (1) 胚胎移植前的准备 ① 胚胎的采集 a. 胚胎的来源:一种是采用 技术 ( 简称超排 ) ,以增加可用卵的数量;另一种是利用 技术培育胚胎。 b. 要求:胚胎移植的整个过程必须 ,并保持 操作。 超数排卵 体外授精 迅速准确 无菌 ② 供体、受体动物的准备 a. 供体的选择:应先从那些遗传性能 的健康母畜中选择,然后再根据 、繁殖力、年龄、发情周期、对超数排卵的反应及自然排卵是否正常等指标来进一步选择理想的供体群,并建立严格的 。 b. 受体的选择:原则上选择那些 较低、数量较多、健康无病、 正常的适龄母畜作为移植受体。 c. 要求:进行胚胎移植时要求受体母畜的发情 。 ③ 胚胎的保存 胚胎保存是指在一定条件下使胚胎 并保持 的一种方法。 优良而稳定 营养情况 供体档案 发情周期 生产性能 同步化 停止发育 重新恢复发育活性 (2) 胚胎移植的实施 ① 手术法 a. 适宜动物:一般用于 的动物。 b. 过程特点:不同的动物和胚胎细胞数量,胚胎植入的部位 。 ② 非手术法 a. 适宜动物:一般用于大 。 b. 过程特点:将装有胚胎的吸管装入 内,通过子宫颈插入 深部,注入胚胎。 (3) 胚胎移植技术的应用 首先,是充分发挥优良母畜的 ,迅速扩大优良种群。 其次,是保存品种资源,建立 。 中小型 不同 家畜 子宫角 移植枪 繁殖潜力 优良种质资源基因库 3. 胚胎分割技术 胚胎分割技术是把一个胚胎的细胞分成 或 ,经过短暂培养使其修复、发育后,再一同或分别移植到不同的 中妊娠并产生多胎的技术。 (1) 胚胎分割的程序 ① 切割器具的准备:胚胎分割需要的器械有 、倒置显微镜和显微操作仪。在进行胚胎分割之前需要制作 和 。 ② 胚胎的预处理:为了减少切割损伤,胚胎在切割前一般用 进行短时间处理,使透明带软化并变薄或去除透明带。 代孕母 两组 多组 体视显微镜 胚胎固定管 分割针 链霉蛋白酶 ③ 胚胎的分割:将 移入含有操作液的培养皿中,然后在显微镜下用切割针或切割刀把胚胎一分为二。不同发育阶段的胚胎,可以采用 的切割方法。 ④ 分割胚的培养:分割后的半胚需放入 中,或者用 包埋移入中间受体 内,或直接在体外培养到 或 阶段。 ⑤ 分割胚的移植:按照胚胎移植的 操作程序,将发育良好的胚胎移植到受体内后,受体受孕产仔。 不同 发育良好的胚胎 空透明带 琼脂 输卵管 桑椹胚 囊胚 无菌 (2) 胚胎分割技术的应用 在畜牧生产上,常通过胚胎分割来扩大 的数量;可以用来培育遗传特性相同的动物群,为生物学、医学、药学和畜牧学的研究提供实验动物。胚胎切割取样还可以用于胚胎的 鉴定。 优良家畜 性别 4. 胚胎干细胞核移植技术 胚胎干细胞是一种 细胞,它具有发育的 和二倍体核型,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。胚胎干细胞的形态表现为胞体 、泡状、核 。 (1) 胚胎干细胞核移植程序 ① 饲养层细胞培养体系的建立 a. 对培养体系的要求,必须能 干细胞的 ,同时还要 干细胞的分化。 全能性 高度未分化 小 大 促进 生长 抑制 b. 培养胚胎干细胞的方法:首先要在 制备一层细胞,这层细胞称为饲养层,然后把 接种在饲养层上面。 c. 用于饲养层的细胞:一般是胚胎 。 ② 胚胎干细胞的获得:小鼠的胚胎干细胞一般取自 、囊胚和延迟着床的 ;人和猪的胚胎干细胞可从 和 中获得。 ③ 胚胎干细胞的核移植:指把胚胎干细胞核移植到去核的 中, 经过胚激活、胚胎培养、 后由 直接获得克隆动物的技术。 (2) 胚胎干细胞的应用 目前,科学家已成功分离到人的 ,而体细胞克隆技术为生产患者自身的 细胞提供了可能。 干细胞 培养皿底部 成纤维细胞 桑椹胚 囊胚 囊胚 原始生殖细胞 卵母细胞 胚胎移植 代孕母 胚胎干细胞 胚胎干 1. 有关胚胎移植与胚胎分割技术的判断 (1) 在胚胎移植中,对供体母畜要进行超数排卵处理,对供、受体要进行同期发情处理 (     ) (2) 胚胎移植技术中对供体和受体母畜都要进行相同激素处理 (     ) (3) 胚胎分割移植时应选取发育良好、形态正常的囊胚或原肠胚 (     ) (4) 胚胎分割移植实现同卵多胎的成功率较低 (     ) (5) 利用胚胎分割技术可以获得两个基因型完全相同的胚胎 (     ) (6) 胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割 (     ) (7) 在对囊胚进行分割时,要将滋养层细胞均等分割 (     ) 常考基础诊断 × × √ √ × √ × 2. 有关胚胎干细胞的判断 (1) 胚胎干细胞在体外培养条件下具有增殖而不发生分化的特点 (     ) (2) 胚胎干细胞具有胞体小、泡状、核小等特点 (     ) (3) 胚胎干细胞在分化诱导因子的作用下可以向不同类型的组织细胞分化 (     ) × √ √ 据图分析胚胎移植的操作流程 教材热点拓展 (1) 图中供体牛和受体牛分别是哪些?选择标准是什么? 提示   供体牛是良种公、母牛;受体牛是一般受体奶牛和一般受体肉牛。 选择标准:供体是遗传性能和生产性能优良的个体,受体是健康、有繁殖能力的个体。 (2) 对供体牛和受体牛要进行怎样的处理? 提示   对供体母牛进行超数排卵处理;对供、受体母牛进行同期发情处理。 提示 (3) 用于移植的早期胚胎应是发育到哪些阶段的胚胎? 提示   桑椹胚或囊胚。 (4) 排卵和冲卵有什么区别? 提示   排卵是指卵子从卵泡中排出,冲卵是把供体母牛子宫内的早期胚胎冲洗出来。 提示 命题点一 体外授精和胚胎体外培养过程分析 1. 如图表示通过体外授精培育牛的过程,下列叙述错误的是   A. 获取的精子经获能后才能进行体外授精 B. ② 过程只与细胞膜的流动性有关 C. ③ 过程的细胞增殖方式是有丝分裂 D. ④ 过程属于胚胎移植过程 命题探究 答案 解析 √ 解析   在进行体外授精时,获取的精子需获能后才能进行体外授精, A 项正确; 图中的 ② 过程是受精作用,该过程涉及精卵细胞的识别、细胞膜的融合 ( 与膜的流动性有关 ) 、核的融合等, B 项错误; ③ 过程是卵裂过程,该过程的细胞增殖方式是有丝分裂, C 项正确; ④ 过程是将早期胚胎移入受体子宫的过程,属于胚胎移植过程, D 项正确。 2. 培育 “ 试管山羊 ” 的基本过程如下图所示。据图回答下列问题:   (1) 甲过程为 _____________ ,该过程中可通过给母山羊注射 ______________ 使其超数排卵。 卵细胞的获取 答案 解析 外源促性腺激素 解析   分析图示可知,甲过程为卵细胞的采集,一般用外源促性腺激素处理良种母山羊,使其超数排卵。乙过程为精子获能以及受精作用,获能的精子和成熟的卵子在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精。丙过程为早期胚胎培养,在发育培养液中进行。丁过程为胚胎移植,是指将早期胚胎移植到同种的、生理状态相同 ( 而不是性状相同 ) 的其他雌性动物子宫内使之继续发育为新个体。 (2) 乙过程的操作之一是对精子进行 _____ 处理。 ( 3) 乙过程与丙过程中采用的培养液成分不同,乙过程的培养液为 _ ________ 或专用的受精溶液,丙过程的培养液为 ___________ 。 (4) 丁过程是 _________ ,是指将早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的代孕母羊子宫内。 答案 获能 获能溶液 发育培养液 胚胎移植 命题点二 胚胎移植和干细胞技术应用实例分析 3. 牛胚胎移植试验的主要流程如下,下列相关叙述正确的是 ① 供体超数排卵 →② 配种 →③ 胚胎收集 →④ ________ →⑤ 胚胎移植 →⑥ 子代小牛。 A. ① 过程需要注射有关激素,目的是获得更多的卵母细胞并完成减数分裂 B. ③ 过程是以哺乳动物早期胚胎与子宫建立了组织上的联系为前提 C. ④ 过程是 “ 对胚胎进行质量检查 ” ,可移植的胚胎应发育到囊胚或 原肠胚 D. ⑤ 过程成功率的高低主要决定于供、受体生理状况是否一致 解析 答案 √ 解析   卵细胞形成中的减数第二次分裂是在受精作用过程中完成的, A 错误; ③ 过程是以哺乳动物早期胚胎处于游离状态为前提, B 错误; ④ 过程是 “ 对胚胎进行质量检查 ” ,可移植的胚胎应发育到桑椹胚或囊胚, C 错误; ⑤ 过程成功率的高低主要决定于供、受体生理状况是否一致, D 正确。 4.(2017· 三明一中第二次月考 ) 下图为经过体外授精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程,请回答下列问题: (1)A 细胞是 ______________ , 在进行体外授精前要对精子 进行 _____ 处理。 答案 ( 次级 ) 卵母细胞 解析 解析   A 细胞是次级卵母细胞,在进行体外授精前要对精子进行获能处理。 获能 (2) 进行胚胎分割时,应选择发育到 _____________ 时期的胚胎进行操作。 (3) ② 指的是 _______ 。 解析 解析  进行胚胎分割时,应选择发育到桑椹胚或囊胚时期的胚胎进行操作。 答案 桑椹胚或囊胚 囊胚腔 解析  图中 ① 是内细胞团, ② 是囊胚腔。 (4) 在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,应注意 _____________________ 。 答案 要将内细胞团均等分割 解析 解析  在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,应注意要将内细胞团均等分割。 (5) 受体母牛必须和供体母牛是同种,并且要经过 _________ 处理。 (6) 将胚胎移植入受体后,还要对受体母牛进行是否 _____ 的检查。 解析  受体母牛必须和供体母牛是同种,并且要经过同期发情处理。 同期发情 妊娠 解析  将胚胎移植入受体后,还要对受体母牛进行是否妊娠的检查。 5.(2017· 北京师范大学附属实验中学联考 ) 如图为哺乳动物的胚胎干细胞及其分化的示意图。请据图回答下列问题:   (1) 胚胎干细胞是从动物胚胎发育至 _____ 期的内细胞团或胎儿的 ________ _______ 中分离得到的一类细胞。 答案 囊胚 解析 解析   胚胎干细胞是由早期胚胎或原始生殖细胞中分离出来的一类细胞,这个早期胚胎指的是囊胚阶段的内细胞团。 原始生 殖细胞 解析   图中分化程度最低的干细胞是胚胎干细胞,其全能性最高,在体外培养条件下,在培养液中加入分化诱导因子,则该种干细胞可被诱导分化形成不同类型的组织细胞。 (2) 图中分化程度最低的干细胞 是 ___________ 。 在体外培养条件下,培养液中加 入 ________ 因子, 可诱导该种干细胞向不同类型的组织细胞分化。 答案 胚胎干细胞 解析 分化诱导 ( 3) 在机体内,皮肤干细胞分化成皮肤细胞是机体细胞中基因 ___________ 的结果。 答案 选择性表达 解析 解析   细胞分化是细胞中基因选择性表达的结果。 (4) 某患者不能产生正常的白细胞,通过骨髓移植可以达到治疗的目的。骨髓移植的实质是将图中的 _______ 细胞移植到患者体内。 答案 造血干 解析 解析   骨髓是人体的造血组织,存在有造血功能的干细胞,骨髓移植的实质是将造血干细胞移植到患者体内。 (5) 若要克隆某种哺乳动物,从理论上分析,上述红细胞、白细胞、皮肤细胞、神经细胞中不能作为供体的细胞是成熟的 _______ ,其原因是 _______________________________ 。 答案 红细胞 解析 解析   克隆某种哺乳动物需要供体提供细胞核,而哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,所以不能作为供体。 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核 矫正易错 强记长句 1. 精子获能是指精子获得受精 “ 能力 ” ,而不是获得能量。 2. 排卵是指卵子从卵泡中排出,而不是卵泡从卵巢中排出。 3. 受精的标志 ≠ 受精完成的标志:受精的标志是在透明带和卵细胞膜之间观察到两个极体;而受精完成的标志是雌、雄原核的融合。 4. 胚胎移植过程中两次使用激素:第一次常用孕激素对受、供体进行同期发情处理;第二次用促性腺激素处理供体使其超数排卵。 5. 胚胎移植过程中有两次检查:第一次对收集的胚胎进行检查;第二次对受体母畜是否妊娠进行检查。 6. 由于胚胎干细胞具有 “ 全能性 ” ,又能传代培养,也可以冷冻保存,因此它可以为核移植提供源源不断的核供体。 易错警示突破选择题 1. 性原细胞通过 有丝分裂 进行增殖,通过 减数分裂 形成配子。 2. 受精过程:获能的精子穿过 放射冠和透明带 → 精卵通过细胞表面的 糖蛋白 相互识别 → 精子遗传物质进入卵细胞。 3. 胚胎发育过程: 受精卵 → 卵裂 → 桑椹胚 → 囊胚 → 原肠胚 → 组织器官分化 → 幼体。囊胚开始出现细胞分化,原肠胚出现胚层分化。 4. 胚胎移植的基本程序: 对供、受体的选择和处理 → 配种或进行人工授精 → 对胚胎的收集、检查、培养或保存 → 胚胎移植 → 移植后检查。 5. 胚胎移植的优势是可以 充分发挥雌性优良动物的繁殖潜力。 长句应答突破简答题 重温高考 演练模拟 1 2 3 4 答案 解析 1. 下列关于小鼠体外授精及胚胎发育的叙述,错误的是 A. 精子在获能液中于 37 ℃ 、 5% CO 2 条件下培养的目的是使精子获能 B. 小鼠在特定光控周期条件下饲养,注射相关激素有促进超数排卵的作用 C. 分割的胚胎细胞有相同的遗传物质,因此发育成的个体没有形态学差异 D. 注射到囊胚腔中的胚胎干细胞可以参与个体器官的发育 √ 5 1 2 3 4 5 解析   精子在获能液中培养的目的是使精子获能,其培养条件应符合动物细胞培养要求, A 项正确; 小鼠在特定光控周期条件下饲养的目的是通过特定的光周期调控其性激素的分泌,注射促性腺激素的目的是促进其超数排卵, B 项正确; 虽然分割的胚胎具有相同的遗传物质,但环境也会对胚胎的发育产生影响,导致发育的个体出现形态学差异, C 项错误; 胚胎干细胞具有发育的全能性,注射到囊胚腔中的胚胎干细胞可以参与个体器官的发育, D 项正确。 答案 解析 2.(2015· 天津, 6)2015 年 2 月 3 日,英国议会下院通过一项历史性法案,允许以医学手段培育 “ 三亲婴儿 ” 。三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。     据图分析,下列叙述错误的是 A. 该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代 B. 捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给三亲婴儿 C. 三亲婴儿的染色体全部来自母亲提供的细胞核 D. 三亲婴儿的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术 √ 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 解析   从图中可知,母亲卵母细胞只是提供了细胞核,而线粒体位于细胞质中,因此可以避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代, A 正确; 红绿色盲位于细胞核内的染色体上,捐献者只是提供了细胞质,所以捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给三亲婴儿, B 正确; 染色体全部位于细胞核内,从图中可知,三亲婴儿的染色体一半来自母亲、一半来自父亲, C 错误; 从图中可知,体外授精完成后,还需要进行早期胚胎培养,当培养到桑椹胚或囊胚时再通过胚胎移植,移植到母亲子宫内继续发育, D 正确。 3.(2017· 湖南八校联考 ) 随着生物科学技术的发展,动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况,供体 1 是良种荷斯坦高产奶牛,供体 2 是健康的黄牛,请据图回答下列问题: 1 2 3 4 5 (1) 应用 1 中获得的良种小牛,遗传物质来源于 _____________ 个体,性别为 _____ 。 1 2 3 4 5 答案 雌性 解析 解析   应用 1 属于核移植技术,其中重组细胞的细胞核来自供体 1 、细胞质来自供体 2 ,所以良种小牛的遗传物质来自供体 1 和供体 2 ,其中控制性别的基因位于细胞核中,所以良种小牛的性别与供体 1( 母牛 ) 相同。 供体 1 和供体 2 (2) 在应用 2 、 3 、 4 中,若要使精子和卵细胞在体外成功结合,需要对精子进行处理,使其 _____ 。 1 2 3 4 5 答案 解析 解析   只有获能的精子才能与成熟的卵细胞完成受精作用。 获能 (3) 应用 3 可解决良种动物快速大量繁殖的问题;对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将 ________ 均等分割,否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育,如需做性别鉴定,还需从 ______ 细胞取样做 DNA 分析。 1 2 3 4 5 答案 滋养层 内细胞团 解析 解析   胚胎分割时,囊胚期的内细胞团应均等分割,这样有利于胚胎的恢复和进一步发育。从滋养层细胞取样做 DNA 分析可鉴定性别。 (4) 应用 4 中细胞进行定向诱导, 可分化形成各种组织和器官。 在胚胎干细胞培养过程中除需 要适宜的温度、无菌、无毒等 环境条件以外,营养液通常含 有葡萄糖、氨基酸、无机盐、 维生素、核苷酸,还要加入 __________________ ; 向培养液中通入 95% 空气和 5% 二氧化碳,空气中的氧气参与细胞的代谢,二氧化碳可以维持培养液的 ____ 。 1 2 3 4 5 答案 pH 解析 动物血清 ( 或血浆 ) 1 2 3 4 5 解析   培养动物细胞时,培养液中还应加入血清或血浆。向培养液中通入 CO 2 可维持培养液 pH 的稳定。 4.(2017· 衡阳调研 ) 科学家利用活体卵子及皮肤成纤维细胞,在实验室已成功克隆出了数个人体胚胎,进而可开发出有研究价值的胚胎干细胞。回答下列问题: (1) 胚胎干细胞在形态上表现为胞体小、细胞核 ___ 、泡状等特点,在功能上具有 _____________ 。 自然状况下的胚胎干细胞是从哺乳动物的 ____ ____________________ 中分离出来的一类细胞。 1 2 3 4 答案 大 5 解析 解析   胚胎干细胞在形态上表现为胞体小、核大、泡状等特点,在功能上具有发育的全能性。自然状况下的胚胎干细胞是从哺乳动物的早期胚胎或原始生殖细胞中分离出来的一类细胞。 发育的全能性 胚胎或原始生殖细胞 早期 (2) 若将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变,在分子水平上需要采用 _______________________ 技术。 1 2 3 4 答案 DNA 分子杂交 ( 基因探针 ) 5 解析 解析   若将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变,在分子水平上需要采用 DNA 分子杂交技术。 (3) 通过胚胎干细胞体外诱导分化,可培育出人造组织器官,解决目前临床上存在的 _____________ 和 _______________________ 问题。 供体器官不足  器官移植后存在免疫排斥 解析   通过胚胎干细胞体外诱导分化,可培育出人造组织器官,可以解决目前临床上器官移植存在的两大问题:供体器官不足和器官移植后存在免疫排斥。 (4) 科学家克隆人体胚胎时选用活体卵子,而不用精子,其原因是 ______ _________________________________________________________ 。 1 2 3 4 答案 卵细胞含有早期胚胎发育所需要的营养物质;卵细胞较大,也较易操作 5 解析 解析   科学家克隆人体胚胎时选用活体卵子,而不用精子,其原因是卵细胞较大,营养物质丰富,含有早期胚胎发育所需要的营养物质,也较易操作。 5. 根据下列有关胚胎工程的示意图,分析回答下列问题: 1 2 3 4 5 (1) 为使 A 羊超数排卵,向其注射 _______ 激素,选择 _____________ 期的卵细胞进行体外授精。 答案 促性腺 减数分裂 Ⅱ 中 解析 解析   要使雌性母羊超数排卵应注射促性腺激素,进行体外授精应选择减数分裂 Ⅱ 中期的卵细胞。 (2) 将早期胚胎注入 D 羊子宫内的技术叫 _________ , D 羊被称为 _____( 填 “ 供体 ” 或 “ 受体 ” ) ;为使 D 羊的生理状况更适合完成该技术操作,要对 D 羊进行 ________ 处理以提高成功率。 1 2 3 4 答案 胚胎移植 5 受体 同期发情 解析 解析   将胚胎注入代孕母体内常用的方法是胚胎移植, D 羊是代孕羊,是受体,为了使 D 羊的生理状况更适合完成胚胎移植,应对 D 羊进行同期发情处理。 (3) 从早期胚胎分离出的 ES 细胞可诱导分化出不同的组织细胞,这是因为在功能上 ES 细胞具有 _____________ ;早期胚胎培养时,培养液中除营养成分外,还需加入 ________ 。 1 2 3 4 答案 5 解析 解析   ES 细胞具有发育的全能性,早期胚胎培养时,培养液中还需要加入动物血清等物质。 发育的全能性 动物血清 课时作业 1 2 3 4 5 答案 1.(2018· 石家庄第二中学模拟 ) 下列关于动物细胞工程和胚胎工程的叙述,正确的是 A. 乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养 B. 细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行 C. 采用胚胎分割技术产生同卵多胚的数量是有限的 D. 培养早期胚胎的培养液中含维生素、激素等多种能源物质 √ 6 7 8 9 10 解析 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   A 项错,癌细胞比成熟动物细胞更易进行离体培养,体外培养的癌细胞对生长因子的需要量显著低于正常细胞; B 项错,细胞核移植不一定是在同种动物、同种组织之间进行,如可以将一种生物体细胞的细胞核移植到另一种生物去核的卵细胞中; C 项对,随着胚胎分割次数的增多,分割胚的发育能力明显降低,获取同卵多胚的数量有限; D 项错,维生素和激素都不能提供能量。 答案 2. 下列关于高等哺乳动物受精与胚胎发育的叙述,正确的是 A. 绝大多数精卵细胞的识别具有物种特异性 B. 卵裂球细胞的体积随分裂次数的增加而不断增大 C. 囊胚的滋养层细胞具有发育全能性 D. 原肠胚发育分化形成内外两个胚层 √ 解析 解析   胚胎发育的卵裂期,卵裂球的总体积基本不变,因此细胞的体积会随着分裂次数的增加而不断减小;囊胚的滋养层细胞不具有发育全能性,只能发育成胎膜和胎盘,内细胞团细胞才具有发育全能性;原肠胚发育分化形成内、中、外三个胚层。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 3. 下图是利用胚胎工程技术培育优质奶牛的主要步骤,下列叙述正确的是   A. 胚胎移植可以定向产生基因突变 B. 可选择在桑椹胚期进行胚胎分割 C. ①② 两个胚胎具有不同遗传物质 D. ③ 可移植到任何母牛子宫内发育 √ 解析 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   该技术是胚胎分割移植技术。基因突变是不定向的,胚胎移植中不可能产生定向的基因突变,所以 A 错误; 胚胎分割一般选择发育良好的桑椹胚或囊胚, B 正确; 分割后的胚胎具有相同的遗传物质, C 错误; 早期胚胎 ③ 要移植到经过同期发情处理的同种母牛的子宫内发育,所以 D 错误。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 解析 4. 下图为哺乳动物胚胎工程的有关操作流程。下列叙述正确的是   A. ① 过程运用超数排卵技术可得到多个胚胎 B. ③ 过程可以用胃蛋白酶处理囊胚获得干细胞 C. ④ 过程需要在无菌的二氧化碳培养箱中进行 D. ⑤ 过程可以直接获得各种效应 T 细胞 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析  题图中 ① 过程指早期胚胎的体外培养, ② 过程指胚胎移植, ③ 过程指胚胎干细胞的获取, ④ 过程指胚胎干细胞的培养, ⑤ 过程指利用胚胎干细胞培育各种组织细胞。运用超数排卵技术只能获得多个卵母细胞;从早期胚胎 ( 囊胚 ) 中分离内细胞团 ( 胚胎干细胞 ) 一般用胰蛋白酶处理;动物细胞培养都需要在无菌的二氧化碳培养箱中进行;利用胚胎干细胞可以培育出多种淋巴细胞,但效应 T 细胞需经相应抗原的刺激才能获得。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 解析 5. 对于大多数家畜来说,精子在睾丸内形成的时间为两个月左右,而卵细胞的形成过程比较复杂。请说出初级卵母细胞的减数分裂 Ⅰ 完成的时间和部位分别是在 A. 排卵前后,在卵巢内 B. 受精前,在卵巢内 C. 排卵前后,在输卵管 D. 受精时,在输卵管内 解析  初级卵母细胞的减数分裂 Ⅰ 是在雌性动物排卵前后完成的,其结果是产生一个次级卵母细胞和第一极体,进入输卵管,准备与精子受精。 √ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 6.(2017· 濮阳三模 ) 右 面是繁育良种奶牛的 示意图,据图回答下列问题: (1) 对供体母牛用 __________ 处理可获得 更多的卵细胞,经人工授精后可得到早期 胚胎。在胚胎移植前,若对胚胎进行性别 鉴定,可以在分子水平上对早期胚胎进行 性别鉴定,也可以在细胞水平上通过对 _________ 的 分析进行性别鉴定。体外培养受精卵时,培养液中提供 CO 2 的目的是 _______________ 。 若要对囊胚阶段的胚胎进行分割,其操作过程中需要注意的问题是 ________ __________ 。 答案 解析 促性腺激素 性染色体 维持培养液的 pH 将内细胞团均等分割 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   对供体母牛用促性腺激素处理可使其超数排卵,以获得更多的卵细胞。若在细胞水平上对胚胎进行性别鉴定,可通过对性染色体进行 分析并加以鉴别。体外培养受精卵时,培养液中提供的 CO 2 用于维持培养液的 pH 。若要对囊胚阶段的胚胎进行分割,需要注意将内细胞团均等分割。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (2) 对受体母牛要进行同期发情处理是为了 ___________________________ ,图示流程中冲卵的 “ 卵 ” 是指 _________ 。实际生产中常利用体细胞克隆技术保持供体母牛的许多优良性状,操作中用于核移植的体细胞一般选用 ___ 代以内的细胞,其原因是 ________________________________ ___________ 。 解析 答案 使供体、受体的生理变化相同 早期胚胎 10 10 代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   对受体母牛要进行同期发情处理是为了给供体的胚胎移入受体提供相同的生理环境。题图过程中的冲卵实际上是获得早期胚胎。实际生产中常利用体细胞克隆技术保持供体母牛的许多优良性状,操作中用于核移植的体细胞一般选用 10 代以内的细胞,其原因是 10 代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 7.(2017· 琼海嘉积中学一模 ) 英国纯血马是世界顶级马术比赛的常用马种,其数量少,生育力低。现代生物工程能有效提高优质马的生育效率。请回答下列问题: (1) 可以用由 ____ 分泌的激素处理适龄纯血母马,使其一次性排出比自然情况下多几倍到几十倍的卵子。采集的卵母细胞人工培养至减数第二次分裂的中期。培养过程要定期更换培养液,其原因是 ______________ __________________________________________ 。 垂体 长时间不更换培养液,会导致细胞代谢产物的积累而毒害细胞 解析   用垂体分泌的促性腺激素处理适龄纯血母马,可使其超数排卵。采集的卵母细胞培养过程中要定期更换培养液,防止因细胞代谢产物的积累而毒害细胞。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 答案 解析 (2) 为取得同卵双胎或多胎,可以在胚胎发育的 _____________ 期用机械方法将胚胎分割。 答案 桑椹胚或囊胚 解析 解析   为提高胚胎的利用率,可以在胚胎发育的桑椹胚或囊胚期用机械方法将胚胎分割,以取得同卵双胎或多胎。 (3) 随着动物体细胞克隆技术的发展,人们可以将纯血马的 _____________ 移入其他马的 _______ 细胞中,将其激活并发育成 _________ ,植入代孕母马体内。 体细胞细胞核 去核卵 早期胚胎 解析   利用克隆技术可以将纯血马的体细胞细胞核移入其他马的去核细胞中,将其激活并发育成早期胚胎,植入代孕母马体内。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (4) 克隆技术在带来巨大社会效益和经济效益的同时,也对人们的传统观念造成极大冲击。我国政府的态度是禁止 _____ 性克隆。 答案 生殖 解析 解析   在克隆人伦理问题方面,我国政府的态度是禁止生殖性克隆但不反对治疗性克隆。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 8.(2017· 银川一中第四次月考 ) 干扰素是治疗癌症的重要药物,它必须从血液中提取,每升人血液中只能提取 0.5 μg ,所以价格昂贵。美国加利福尼亚的某生物制品公司用下图的方式生产干扰素。试回答相关问题: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (2) 通常情况下,对供体和受体母牛选择后,要用激素进行 _____________ 。并用激素对供体母牛做 _________ 处理。 (1) 若要使获得的转基因牛乳汁中含有人干扰素,构建的基因表达载体必须包括:乳腺蛋白基因的启动子、人干扰素基因、终止子、 ________ 和复制原点等。 答案 标记基因 解析 解析   基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点。 同期发情处理 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   胚胎移植过程中要注意对供、受体母牛进行同期发情处理,同时要用促性腺激素对供体母牛进行超数排卵处理,以获得更多的后代。 超数排卵 (3) 为了实现干扰素的批量生产,早期胚胎进行移植之前要进行质量检测,并要求早期胚胎细胞中的性染色体组成为 ____ 。选择发育良好的囊胚或 _____ 胚进行移植。为了提高胚胎利用效率,可在这两个阶段进行胚胎分割,胚胎分割可以看作动物 _____( 填 “ 有性 ” 或 “ 无性 ” ) 繁殖的方法之一。 答案 XX 解析 解析   因为需要从乳汁中提取药物,所以应选择性染色体组成为 XX 的雌性个体;胚胎分割是无性繁殖的方法之一。 桑椹 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 无性 (4) 近年来,关于胚胎干细胞的研究越来越多。胚胎干细胞具有发育的全能性,如图所示的细胞 A 和细胞 B 分别是 ________ 细胞、 ________ 细胞,可以从这些细胞中获得胚胎干细胞。 答案 内细胞团 解析 解析   通常从早期胚胎的内细胞团或胎儿的原始生殖细胞中获得胚胎干细胞。 原始生殖 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 9.(2017· 河南八校联考 ) “ 三亲婴儿 ” 的培育过程可选用如下技术路线。请回答下列问题: (1) 过程 ① 采用的是细胞工程中的 _______ 技术。图中 “ 三亲婴儿 ” 的染色体来自 _____ 和父亲提供的细胞核。 答案 核移植 解析 母亲 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   图中过程 ① 是将母亲卵母细胞中的细胞核移植到捐献者去核的卵母细胞中,这属于细胞工程中的核移植技术。根据图示可知, “ 三亲婴儿 ” 的全部染色体来自母亲卵母细胞和父亲精子中的细胞核。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (2) 过程 ③ 采用的是胚胎工程中的 _______________ 技术,该过程所用培养液的成分除一些无机盐和有机盐类外,还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分以及 _________ 等物质。 答案 ( 早期 ) 胚胎培养 解析 动物血清 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 解析   过程 ③ 表示将受精卵培育成早期胚胎,该过程采用的是胚胎工程中的 ( 早期 ) 胚胎培养技术。哺乳动物胚胎培养需要 “ 两盐 ” ( 无机盐和有机盐 ) 、 “ 两素 ” ( 激素和维生素 ) 、 “ 两酸 ” ( 核苷酸和氨基酸 ) 和动物血清等。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (3) 若捐献者携带红绿色盲基因,则该基因不能遗传给 “ 三亲婴儿 ” ,原因是 ________________________________________________________ 。 答案 解析 红绿色盲基因属于核基因,而捐献者提供的是去核的卵母细胞 解析   由于红绿色盲基因属于核基因,而捐献者提供的是去核的卵母细胞,因此,即使捐献者携带红绿色盲基因,也不会遗传给 “ 三亲婴儿 ” 。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 10. 科研人员利用胚胎干细胞 (ES 细胞 ) 对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图所示,请回答相关问题:   (1) 过程 ① 获得重组胚胎之前需要通过 _______ 技术获得重组细胞,接受细胞核的去核卵细胞应该处于 ___________________( 时期 ) 。 答案 解析 核移植 解析   过程 ① 获得重组胚胎之前需要通过核移植技术获得重组细胞,接受细胞核的去核卵细胞应该处于减数第二次分裂中期。 减数第二次分裂中期 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (2) 步骤 ② 中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其 _________ 中分离出 ES 细胞。步骤 ③ 中,需要构建含有干扰素基因的 _________ 。构建之前可以利用 _____ 技术对目的基因进行扩增。 答案 解析 内细胞团 解析   ES 细胞可以从囊胚的内细胞团中分离出来。将目的基因导入受体细胞前,需要构建含有目的基因 ( 干扰素基因 ) 的表达载体。 PCR 技术可在体外大量扩增目的基因。 表达载体 PCR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (3) 为检测干扰素基因的表达情况,可采用 _______________ 方法,若有杂交带出现,表明目的基因已成功表达。 答案 解析 解析   为检测目的基因的表达情况,可采用抗原 — 抗体杂交技术,若有杂交带出现,表明目的基因已成功表达。 抗原 — 抗体杂交 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10