【生物】2018届一轮复习人教版专题23-1实验室的微生物培养学案 17页

‎【学案导航】---明方向！‎ ‎【课程学习目标】‎ ‎1.能说出培养基的概念、营养组成和分类。‎ ‎2.知道不同对象的无菌操作方法。‎ ‎3.掌握大肠杆菌纯化培养的步骤。‎ ‎4.知道大肠杆菌纯化的方法。‎ 第一层级：预学区.不看不讲 ‎【知识体系梳理】‎ 一、培养基 ‎1.概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其‚ 的营养基质。‎ ‎2.营养组成：一般都含有ƒ 和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及④ 的要求。‎ ‎3.种类：按照物理性质可分为⑤ 培养基和固体培养基。‎ 二.无菌技术 ‎1.含义：指在培养微生物的操作中，所有防止⑥ 的方法。‎ ‎2.关键：防止⑦ 的入侵。‎ ‎3.不同对象的无菌操作方法⑧(连线)‎ 三、 大肠杆菌的纯化培养 ‎1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ‎①操作步骤 →⑨ →→⑩ → ‎ ‎②倒平板的方法及注意事项 a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程： 。‎ b.甲、乙、丙中的灭菌方法是 。‎ c.丁中的操作需要等待 才能进行。‎ ‎2.纯化大肠杆菌 ‎(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成 细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。‎ ‎(2)主要方法：图甲可表示用 法接种获得的平板；图乙可表示用 法接种获得的平板。‎ ‎(3)纯化原理：图甲菌体的分散是通过一系列的 操作实现的；图乙菌体的分散是通过图丙 和图丁 操作实现的。‎ ‎5．菌种的保存方法 ‎(1)对于频繁使用的菌种，可以采用 的方法。‎ ‎(2)对于需要长期保存的菌种，可以采用 的方法。‎ ‎【基础学习交流】‎ ‎1.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。‎ ‎①培养细菌用的培养基与培养皿 ‎②玻棒、试管、烧瓶和吸管 ‎③实验操作者的双手 ‎2.①为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？‎ ‎②平板冷凝后，为什么要将平板倒置？‎ 第二层级：导学区.不议不讲 ‎【重点难点探究】‎ 知识点一:培养基的配制 1. 在配制培养基的时候一般要遵循哪些原则？‎ ‎2.微生物、人和动物、植物需要的营养物质有什么不同 知识点二：消毒和灭菌的辨析 请从条件、结果、常用方法和应用范围四个角度比较消毒和灭菌，并完成下表：‎ 项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 ‎[]‎ 灭菌 知识点三：大肠杆菌的纯化培养 ‎1.两种纯化细菌方法的比较 项目 优点 缺点 适用范围 平板划 线法 稀释涂 布平板法 ‎2.平板划线操作的注意事项 ‎（1）操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要对接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的有什么不同？学*科网 ‎（2）第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始其目的是？‎ ‎【思维拓展应用】‎ 例1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(　　)‎ ‎①可以用相同的培养基　②都需要使用接种针进行接种　③都需要在火焰旁进行接种　④都可以用来计数活菌 A．①②　　　　　　　　 B．③④‎ C．①③ D．②④ ‎ 例2.如图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：‎ ‎(1)图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。‎ ‎(2)接种操作为什么一定要在酒精灯火焰附近进行？‎ ‎________________________________________________________________。‎ ‎(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？________________________。‎ ‎(4)如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。‎ 第三层级：固学区.不练不讲 ‎【当堂智能检测】‎ ‎1．下列有关培养基叙述正确的是(　　)]‎ A．培养基的营养成分都有碳源、氮源、水、无机盐 B．除水以外的无机物仅提供无机盐 C．用培养基培养甲型H1N1流感病毒作为科学研究 D．培养基配制过程中应调pH，适应各微生物的生长 ‎2．关于灭菌和消毒的不正确的理解是(　　)‎ A．灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是相同的 C．接种环用灼烧的方法灭菌 D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌等 ‎3．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是(　　)‎ A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 ‎4．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是(　　)‎ A．接种时再拿起来方便 B．在皿底上标记日期等方便 C．正着放置容易破碎 D．防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 ‎5．氯苯化合物是重要的有机化工原料，其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表：‎ 液体培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯苯 氯化钠 硝酸铵 无机盐(无碳)‎ 蒸馏水 Ⅰ号 ‎10 g ‎ ‎5 g ‎ ‎5 mg ‎ ‎5 g ‎ ‎－‎ ‎－‎ ‎1 L ‎ Ⅱ号 ‎ ‎－‎ ‎－‎ ‎50 mg ‎ ‎5 g ‎ ‎3 g ‎ 适量 ‎ ‎1 L ‎ Ⅲ号 ‎ ‎－‎ ‎－‎ ‎20～80 mg ‎5 g ‎ ‎3 g ‎ 适量 ‎ ‎1 L 图1‎ ‎(1)配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的________。‎ ‎(2)培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是____________。‎ ‎(3)在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_____________。‎ ‎(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。‎ ‎(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线(如图2)。从图2可知，SP1菌在________培养条件下最早停止生长，其原因是________________________________________。‎ 图2‎ 第四层级：思学区.不思不复 ‎【思维导图构建】‎ ‎【参考答案】‎ 知识体系梳理 营养物质‚生长繁殖ƒ水、碳源、氮源④特殊营养物质⑤液体⑥杂菌污染⑦外来杂菌⑧(连线) ‚⑥－b－ⅠⅡ；ƒ④⑤－a－ⅢⅣ⑨称量⑩灭菌倒平板丙→乙→甲→丁灼烧灭菌平板冷却凝固单个平板划线稀释涂布平板连续划线梯度稀释涂布平板临时保藏甘油管藏 ‎【基础学习交流】‎ ‎1.①、②需要灭菌；③需要消毒。‎ ‎2.①通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。‎ ‎②平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。‎ ‎　【重点难点探究】‎ 知识点一:培养基的配制 ‎1.(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。‎ ‎(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。‎ ‎(3)pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。‎ ‎2.微生物需要的营养成分有水、无机盐、碳源、氮源，有些微生物还需要特殊营养物质，如生长因子；在人和动物中，营养物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类；在植物中，营养物质包括矿质元素、水、二氧化碳三类。学@科网 知识点二：消毒和灭菌的辨析 项目 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温 煮沸消毒法 日常用品 和的物 理或化 学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 巴氏消毒法 不耐高温 的液体 化学药剂 消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的 理化因 素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、‎ 金属工具 高压蒸汽 灭菌法 培养基及容 器的灭菌 知识点三：大肠杆菌的纯化培养 ‎1.‎ 项目 优点 缺点 适用范围 平板划 线法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 适用于 好氧菌 稀释涂 布平板法 可以计数，可以观察菌落特征 操作复杂、‎ 需要涂布 多个平板 适用于厌氧菌 和兼性厌氧菌 ‎2.（1）第一次操作目的是杀死接种环上原有的微生物；每次划线之间操作目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少；划线结束操作目的是杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。‎ ‎（2）能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。‎ ‎【思维拓展应用】‎ 例1．C 解析　平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，故②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④错误。‎ 例2.答案：(1)平板划线　稀释涂布平板　接种环　涂布器　灼烧灭菌 ‎(2)火焰附近存在着无菌区域 ‎(3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长 ‎(4)图乙 解析：图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。‎ ‎【当堂智能检测】‎ ‎1．A 2．B 3．C 4．D ‎5．答案：(1)琼脂　(2)先调pH，后灭菌　(3)硝酸铵(4)芽孢　(5)20 mg/L氯苯　碳源最早耗尽 解析：本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程，意在考查学生的图表信息转换与分析能力。配制固体培养基时应在液体培养基的成分中再加入琼脂作为凝固剂。在配制培养基时应先调节pH，后进行灭菌，防止灭菌后在调节pH的过程中污染培养基。在营养缺乏、环境恶劣时，微生物可以形成休眠体——芽孢，来度过不良环境。据图可知，SP1菌在20 mg/L氯苯培养条件下菌体数最早达到最大值，即最早停止生长，原因是在Ⅲ号培养液中，氯苯是唯一碳源，由于20 mg/L氯苯培养条件下碳源最少，因此也最早被耗尽，使SP1菌停止生长。‎ ‎【思维导图构建】‎ ‎⑦平板划线法⑧碳源、氮源⑨灭菌 ‎【典例指津】---授技法！‎ 热点题型一 培养基的选择与无菌技术 例1．当水源不洁或供水管道破损等可能导致生活饮用水的污染，因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的，我国生活饮用水水质标准中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠杆菌群不得大于3个/L。‎ ‎(1)检验细菌的数量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，再将水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为____________。记录细菌数量除了用活菌计数法，还可以直接取水样用____________法直接进行计数。‎ ‎(2)培养基中应含有碳源、________和水等物质，若要从水体中分离出纤维素分解菌，则碳源应为________。‎ ‎(3)如分别取0.1 mL已稀释10倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为3、2、2、1，则该水样________(符合/不符合)我国生活饮用水标准。‎ ‎(4)纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________(可/不可)用加入抗生素的方法防止杂菌感染，原因是_________________________________‎ ‎___________________________________________________________________。‎ ‎【答案】　(1)稀释涂布平板法　显微镜直接计算(血细胞计数板计数法)‎ ‎(2)氮源、多种无机盐　纤维素 ‎(3)不符合 ‎(4)高压蒸汽灭菌　不可　大肠杆菌也是细菌，如果加入抗生素也会影响大肠杆菌的生长 ‎【提分秘籍】‎ ‎1.误认为所有微生物培养基中均需加入“生长因子”‎ 碳源、氮源、水分、无机盐、生长因子是微生物生长必需的五大营养成分，但大多数培养基中都含碳源、氮源、水分、无机盐四类物质，可能不需额外添加“生长因子(如维生素)”，这是因为许多微生物可自行合成这些生长因子，而对那些合成能力有限或不能合成生长因子的微生物(如乳酸菌)，则需在培养基中添加诸如维生素等生长因子。‎ ‎2.混淆消毒与灭菌 对于活体宜消毒不可说成灭菌，而对于培养基、接种工具、培养皿等必须灭菌。‎ ‎【举一反三】‎ 研究人员为测试新抗生素X对三种细菌（E．coli、S．albus、B．subtilis）的杀菌效果，将三种细菌分别接种在培养皿中，然后将分别沾有1万单位、10万单位抗生素X的圆纸片放在布满细菌的培养基表面上．经24小时培养后，测量圆纸片周围清晰区的宽度，数据如表，请分析回答：‎ 细菌 抗生素浓度（万单位）‎ X（1）‎ X（10）‎ E．coli ‎7mm ‎14mm S．albus ‎32mm ‎36mm B．subtilis ‎8mm ‎16mm ‎（1）“细菌喜荤，霉菌喜素”，所以该细菌培养基一般用 来配制，制备培养基的操作顺序是：计算、称量→溶解和熔化→ （用下列字母排序）．‎ a．倒置培养基　b．高压蒸汽灭菌　c．调pH d．分装包扎 e．倒平板 ‎（2）为能彻底消灭培养基中的其他微生物，科学家研究出间隙灭菌法．其程序是：第一天将培养基放入无菌培养箱中：在100℃下维持30min，然后在35～37℃下的放置24h；第二天、第三天重复第一天的操作．请分析：‎ ‎①培养基在100℃下维持30min的目的是 ；‎ ‎②在35～37℃下放置24h后再加热的目的是 ；‎ ‎③怎样证明间隙灭菌法的效果？ ．‎ ‎（3）该实验中利用 法接种细菌于培养基上，并培养菌种逐步分散到培养基的表面．‎ ‎（4）比较1万和10万单位抗生素X在控制E．coli和S．albus方面的效用． ．‎ ‎（5）有病人感染B．subtilis而患病．请解释用25万单位抗生素X治疗该病人是不明智做法的理由 ．‎ ‎【答案】（1）牛肉膏蛋白胨（和酵母提取物）　c→d→b→e→a ‎（2）①杀死活的微生物　‎ ‎②杀死24 h中由细菌芽孢萌发而生长的微生物 ‎③将培养基置于37℃下培养3～5d，如无微生物生长，证明培养基已达到灭菌效果 ‎（3）稀释涂布平板（平板划线法）学*科网 ‎（4）10万单位抗生素X在控制E．coli方面的效果明显优于1万单位抗生素X 在控制S．albus 方面，两者效果差异不显著 ‎（5）缺乏25万单位抗生素X的实验数据 避免抗生素滥用 热点题型二 微生物的分离与培养 例2 有关平板划线操作的叙述不正确的是（ ）‎ A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B．每次划线结束，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种 C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种 ‎【答案】C ‎ ‎【提分秘籍】‎ ‎1.明确每次划线操作中“灼烧接种环”的目的或误认为划线结束后“不必灼烧接种环”‎ 平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同 ‎①第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。‎ ‎②每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。‎ ‎③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。‎ ‎【举一反三】‎ 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,①为土壤样品。下列相关叙述错误的是 ( )‎ ‎ ‎ A. 使用平板划线法可以在⑥上获得单个菌落 B. 如果要测定②中活细菌数量,常采用稀释涂布平板法 C. 图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源 D. 微生物培养前,需对培养基和培养器皿进行消毒处理 ‎【答案】D ‎ ‎【解析】 微生物培养前,需对培养基和培养皿进行灭菌处理。‎ ‎【真题回眸】---知难易！‎ ‎1.（2017江苏卷）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:‎ ‎（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________。‎ ‎（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。‎ ‎（3）下图为连续划线法示意图，在图中_____________ （填图中序号）区域更易获得单菌落。‎ ‎ （4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1 ~5号比色管的苯酚浓度应分别为_____________。‎ 管号 ‎1‎ ‎2‎ ‎3‎ ‎4‎ ‎5‎ ‎6‎ 苯酚浓度（mg/ L）‎ ‎1‎ 如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_____________ （填序号：①5 ②10 ③20）倍后，再进行比色。‎ ‎【答案】（1）蛋白胨、苯酚 （2）增加 稀释涂布 凝固剂 （3）③‎ ‎（4） 0、0．2、0．4、0．6、0．8 ③‎ ‎2.(2016·高考全国卷丙，39)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：‎ ‎(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是________________________________________________________________________。‎ ‎(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有__________________和__________________。分离纯化时应挑选出__________________的菌落作为候选菌。‎ ‎(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。‎ ‎【答案】(1)无菌水　泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 ‎(2)鉴别乳酸菌　中和产生的乳酸(或酸)　具有透明圈 ‎(3)甘油 ‎3.(2014·课标全国Ⅱ，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：‎ ‎(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_______________________________；‎ 然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________________。‎ ‎(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________________。‎ ‎(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。‎ ‎(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。‎ ‎【答案】　(1)检测培养基平板灭菌是否合格　3.8×107‎ ‎(2)灼烧　将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 ‎(3)B　‎ ‎(4)溶解氧　营养物质 ‎【解析】　(1)稀释涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，检测培养基平板灭菌是否合格；每升水样中的活菌数为：(39＋38＋37)/3＝38，再除以0.1乘以100，得到1毫升中的菌数，再乘以1000就是1升中的菌数，故为3.8×107。‎ ‎(2)用平板划线法应先将接种环灼烧灭菌再划线。第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，达到稀释的目的，使得最后能够得到单个菌落。‎ ‎(3)根据图示可知，B为稀释涂布平板法接种后培养得到的菌落。‎ ‎(4)振荡的作用相当于搅拌，可使培养基中各营养分配的均匀和溶氧量大，既能提供充足的氧气又能充分利用营养物质。‎ ‎【能力提升】---长士气！‎ ‎1．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是 ‎(　　)‎ A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时 D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 ‎【答案】　D ‎【解析】　检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数。‎ ‎2．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是(　　)‎ A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次 ‎【答案】B ‎3．现有菌液10 mL，按下图进行系列稀释，在最后一个试管中测得细菌数为20个，则未稀释前的试管中有细菌(　　)‎ A．600个 B．1 200个 C．2×107个 D．2×106个 ‎【答案】C ‎【解析】从本题的图中可看出，每次都是稀释10倍，总共稀释6次，即稀释106倍，最后一个试管为20个，即原来菌液中应该有细菌2×107个。‎ ‎4．为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是(　　)‎ A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异 D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4 ℃保藏的方法 ‎【答案】D ‎【解析】低温4 ℃保藏属于临时保藏的方法。‎ ‎5．有关培养基配制原则表述正确的是(　　)‎ A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响 D．营养物质的浓度越高越好 s5u]‎ ‎【答案】C ‎6．工厂的污水池含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。‎ ‎(1)加入化合物A的培养基属于________培养基。化合物A可为目的菌提供生长所需的________等营养物质。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是________________。‎ ‎(2)微生物培养过程中，防止杂菌污染的关键技术是________，为了排除杂菌污染如何设计对照实验 ‎_________________________________________________________________。‎ ‎(3)在农业生产研究中，常需要进行微生物的培养和计数。下图是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上有很多注意事项。请列举两项。‎ ‎【答案】(1)选择　碳源和氮源　稀释涂布平板法 ‎(2)无菌技术　用不接种的空白培养基作对照，证明培养基制备是否被杂菌污染 ‎(3)①每次划线前要灼烧接种环　②冷却后从上一区划线末端开始划　③首尾区不重叠(任选两个答案)‎ ‎7．人们使用含三丁基锡、三苯基锡等有机锡化合物的油漆涂于船只、海洋建筑物等的表面，有效防止了海洋生物附着生长，但近年来的研究发现油漆中的有机锡可释放入海，对多种生物造成毒害。现欲从海洋底泥中分离分解三丁基锡的微生物。回答下列问题：‎ ‎(1)为了获得能降解三丁基锡的微生物菌种，可在被三丁基锡污染的海洋底泥中取样，并应选用以_____为碳源的培养基进行选择培养。除含有碳源外，培养基还应含有________、________、无机盐和蒸馏水等。‎ ‎(2)实验过程中，玻璃器皿和金属用具可以采用干热灭菌法来灭菌，原因是________________________。‎ ‎(3)常用的微生物接种方法有两种，但只有________________可用于微生物的计数，运用该方法计数的结果往往比实际数目________(填“高”或“低”)。在平板划线操作中，接种环在使用前要先灼烧，其目的是_________________________________________________，‎ 第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，其目的是_______________________。‎ ‎(4)将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在含少量三丁基锡的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜)，观测从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为33小时、15小时、46小时，则应选择微生物________作为菌种进行后续培养。‎ ‎【答案】　(1)三丁基锡　氮源　琼脂 ‎(2)玻璃器皿和金属用具能耐高温，且要保持干燥 ‎(3)稀释涂布平板法　低　杀灭接种环上的微生物　使微生物数目能够随着划线次数的增加而逐步减少，以达到分离的效果 ‎(4)乙 ‎【解析】‎ ‎（1）为了获得能降解三丁基锡的微生物菌种，可在被三丁基锡污染的海洋底泥中取样，并应选用以三丁基锡为碳源的培养基进行选择培养。培养基的成分主要包括碳源、氮源水和无机盐，因此除含有碳源外，培养基还应含有氮源、琼脂、无机盐和蒸馏水等。选择培养基一般为固体培养基，因此培养基中应该加入琼脂作为凝固剂。学#科网 ‎（2）实验过程中，玻璃器皿和金属用具具有能耐高温，且要保持干燥，因此这些器具可以采用干热灭菌法来灭菌。‎ ‎（4）三组实验中， 乙组所用时间最短，说明降解三丁基锡的能力最强，所以应选择乙组中的微生物作为菌种进行后续培养。‎