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- 2021-05-13 发布
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二、细胞工程
2013年真题
1. 1.(海南卷)31.(15 分) 单纯疱疹病毒 I 型(HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗 HSV-1 的单克隆抗体可快速检测 HSV-1。 回答下列问题:
(1)在制备抗 HSV-I 的单克隆抗体的过程中,先给小鼠注射一种纯化的 HSV-1 蛋白,一段时间后,若小鼠血清中抗____的抗体检测呈阳性,说明小鼠体内产生了____反应,再从小鼠的____中获取 B 淋巴细胞。将该 B 淋巴细胞与小鼠的____细胞融合,再经过筛选、检测,最终可获得所需的杂交瘤细胞,该细胞具有的特点是____。
(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体,可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的____中使其增殖,再从____中提取、纯化获得。
(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种 HSV-I 蛋白,其原因是该抗体具有____和____等特性。
2. (山东卷) 35.(8分)科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞(iPS),继而利用iPS细胞
培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠。流程如下:
(1)从黑鼠体内获得体细胞后,对其进行的初次培养称为 ▲ ,培养的细胞在
贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂,这种现象称为 ▲ 。
(2)图中2一细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得,该过程称为 ▲ ;也可
从灰鼠体内取出卵子,通过 ▲ 后进行早期胚胎培养获得。
(3)图中重组囊胚通过 ▲ 技术移入白鼠子宫内继续发育,暂不移入的胚胎可使用
方法保存。
(4)小鼠胚胎干细胞(ES)可由囊胚的 ▲ 分离培养获得。iPS与ES细胞同
样具有发育全能性,有望在对人类iPS细胞进行定向 ▲ 后用于疾病的细胞治疗。
3. (浙江卷)6.实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。下列叙述错误的是
A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒 B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型 D.丁过程得到的细胞具有异质性
4. (江苏卷)11某种极具观赏价值的兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植,可应用多种技术获得大量优质苗,下列技术中不能选用的是
A.利用茎段扦插诱导生根技术快速育苗
B.采用花粉粒组织培养获得单倍体苗
C.采集幼芽嫁接到合适的其他种类植物体上
D.采用幼叶、茎尖等部位的组织进行组织培养
1. (江苏卷)22.(双选)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应,为了克服这个缺陷,可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是
A.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列
B.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列
C.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶
D.一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞
2. (重庆卷)2.题 2 图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述,正确的是
A.①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应 T 淋巴细胞
B.②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C.③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D.④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
3. (重庆卷)5.某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉,其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述,错误的是
A.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害
B.在愈伤组织培培养中加入细胞融合的诱导剂,可获得染色体加倍的细胞
C.出芽是细胞再分化的结果,受基因选择性表达的调控
D.生根时,培养基通常应含 α—萘乙酸等生长素类调节剂
4. (新课标II卷)40.(15 分)
甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物,甲含有效成分 A,乙含有效成分 B。某研究小组拟培育同时含有 A 和 B 的新型药用植物。 回答下列问题:
1)为了培育该新型药用植物,可取甲和乙的叶片,先用 酶和 酶去除细胞壁,获得具有活力的 ,再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成 组织,然后经过 形成完整的杂种植株。这种培育技术称为 。
2) 上述杂种植株属于多倍体,多倍体是指 。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的,而上述杂种植株是可育的,造成这种差异的原因是 。
3) 这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的
5. (天津卷)9.(15
分)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病,野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化,并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合,以获得抗黑腐病杂种植株。
流程如下图。
据图回答下列问题:
(1) 过程①所需的酶是___________ 。
(2) 过程②后,在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的___________存在,这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3) 原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压,其作用是___________。原生质体经过___________再生,进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
(4) 若分析再生植株的染色体变异类型,应剪取再生植株和___________植株的根尖,通过___________、___________ 、___________染色和制片等过程制成装片,然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
(5) 采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组 DNA 进行 PCR 扩增,得到两亲本的差异性条带,可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株 1—4 进行 PCR 扩增的结果。据图判断,再生植株 1—4 中一定是杂种植株的有______________________。
(
6
)对杂种植株进行
接种实验,可筛选出具有高抗性的杂种植株。
1. (全国大纲卷)2.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述,错误的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体,小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质,茎尖培养可用于植物脱除病毒
2012年真题
11.(2012广东卷)2.培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是]
A.组织培养 B.细胞杂交 C.显微注射 D.核移植
12.(2012浙江卷)31.(12分)请根据以下提供的实验材料,完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路,并预测实验结果。实验材料:培养液、正常体细胞、癌细胞、W、胰蛋白酶。
(要求与说明:答题时不考虑加入W后的体积变化等误差。提供的细胞均具有分裂能力,只进行原代培养且培养条件适宜)
(1)实验思路:
①取培养瓶若干个,分组如下:_________。每组设置若干个重复样品。
②各组样品在培养箱中培养一段合适的时间后,各取其中的几个样品,加入____,摇匀,在显微镜下用血细胞计数板分别计数并记录细胞数。
③重复②若干次。
④____________。
(2)预测实验结果(用坐标系和细胞数变化曲线示意图表示):
13.(2012江苏卷)22.下列事实能体现细胞全能性的是
A.棉花根尖细胞经诱导形成幼苗 B.单细胞的DNA在体外大量扩增
C.动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体 D.小鼠体细胞经诱导培育成小鼠
14.(2012江苏卷)31.(1)2,4-D常用于籼稻愈伤组织的诱导, 对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化,在配制分化培养基时需_____(填“升高”、“保持”或“降低”)2,4-D的浓度。
(2)当籼稻愈伤组织在只含有细胞分裂素的培养基上培养时,出现具有分生能力的绿色芽点,但继续出芽,通常在培养基中添加______,以促进幼苗形成。
(3)研究中用显微镜可以观察到的现象是______(填下列序号)。
①绿色芽点细胞排列松散 ②刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离
③胚状体细胞中有叶绿体 ④分化的愈伤组织的各细胞的形态大小一致
(4)经组织培养筛选获得的籼稻叶绿素突变体,其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照,叶绿素总量不变。某同学用______(填序号:①绿色②红色③蓝紫色④黄色)光照射突变体和对照叶片,检测到两者光合放氧差异不大。若取等量色素提取液进行层析,会发现突变体第_____条色素带(自上而下)窄于对照组。
(5)胚乳(3n)由一个精子与两个极核受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织,培育三倍体,需适时晚年除胚,以免胚的存在影响愈伤组织细胞的______,还可避免再生苗中混有____________。
2011年真题
15.(2011年江苏卷)16.下列有关植物组织培养的叙述,正确的是
A.愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞
B.二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株
C.用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子
D.植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得
16.(2011上海生命科学卷)22.下列关于植物组织培养的表述,错误的是
A.外植体可以来自于植物的任何细胞 B.培养应在无菌条件下进行
C.以花粉作为外植体可得到单倍体植株 D.不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同
17.(2011年江苏卷)14.关于现代生物技术应用的叙述,错误的是
A.蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质
B.体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体
C.植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒
D.动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育
18.(2011年浙江卷)31.(12分) 为了探究某物质(X)的作用,研究者提出了以下实验思路:
(1)实验分组:甲组:培养液+Y细胞+ -TdR(标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)+生理盐水
乙组:培养液+Y细胞+ -TdR+X(生理盐水配制)
每组设置若干个重复样品。
(2)分别测定两组的CRD(细胞内的放射性强度),求每组的平均值。
(3)将各样品在适宜条件下培养合适时间后,测定其CRD,求每组平均值并进行统计分析。(与说明,答题时用X、CRD、3H-TdR表示相关名词;Y细胞是能增殖的高等动物体细胞)
请回答:(1)实验目的:
(2)预测实验结果及结论:__________。
(3)实验中采用3H-TdR的原因:_____________。
19.(11天津理综卷)8.(14分)絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物,能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀,起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果,将絮凝性细菌和石油降解菌融合,构建目的菌株。其流程图如下。
据图回答:
(1)溶菌酶的作用是_________________________。
(2)PEG的作用是_________________________。
(3)经处理后,在再生培养基上,未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是____________________________________________________________________。
(4)目的菌株的筛选:筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物,又能在含有_________________的培养基上生长的AB融合菌,选择效果最好的最为目的菌株。
(5)为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果,将目的菌株进行发酵培养,定时取发酵液,加入石油污水中:同时设置_____________________________为对照组。经搅拌、静置各3分钟后,分别测定上层水样的石油浓度COD值(COD值越高表示有机物污染程度越高),计算石油去除率和COD去除率,结果如下图。
(6)目的菌的种群增长曲线是__________________型。在40~44小时,发酵液对石油污水的净化效果最好,其原因是 _________________________________________________________。
参考答案
1. 【答案】(1) HSV—1 蛋白(1 分) 体液免疫(1 分,其他合理答案也给分)
脾脏(1 分,其他合理答案也给分) 骨髓瘤(1 分)
无限增值且产生专一抗体(3 分,其他合理答案也给分) (2)腹腔 腹水(每空 2 分,共 4 分)(3)
纯度高(2 分) 特异性强(2 分,其他合理答案也给分)
【命题立意】本题以单克隆抗体的制备过程,单克隆抗体的特点以及杂交瘤细胞的特点为载体考查学生理解分析能力。
【解题思路】(1)单克隆抗体制备的第一步是免疫动物。先给小鼠注射一种纯化的 HSV-1 蛋白,这就是在免疫小鼠。一段时间后,若小鼠血清中抗 HSV-1 蛋白的抗体检测成阳性,说明小鼠体内产生了体液免疫反应。抗体检测成阳性说明小鼠体内已经有了该抗体,而抗体的产生,就是通过体液免疫来产生的。第二步制备杂交瘤细胞。从小鼠的淋巴器官中(如脾,骨髓,扁桃体,胸腺等)获取 B 淋巴细胞,与小鼠的骨髓瘤细胞融合,再经过筛选检测(我们从淋巴器官中获取的 B 细胞种类很多,有的能产生 HSV-1 蛋白,有的不能,杂交细胞的种类也很多,两两融合中有 B 细胞与 B 细胞的融合,还有骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞的融合,还有 B 细胞与骨髓瘤细胞的的融合及杂交瘤细胞,所以要筛选,检测),最终可获得所需的杂交瘤细胞。(只产生抗 HSV-1 蛋白抗体的 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞,)杂交瘤细胞具有两个亲本细胞的特性。(既能无限增殖,又能产生专一性抗体)
(2)若想获得大量单克隆抗体,通常有两种方法:一是将杂交瘤细胞培养在动物细胞培养液中,然后从动物细胞培养液中分离出单克隆抗体;二则是将杂交瘤细胞注射到小鼠的腹腔中使其增值,然后从小鼠的腹水中提取纯化获得。
(3)单克隆抗体具有:特异性强,灵敏度高的特点。(特异性强:因为它只针对一种蛋白质如 HSV-1 蛋白,灵敏度高:是因为抗体的纯度高,浓度高,能迅速和抗原结合,发生抗原抗体反应)
2. 【答案】1)原代培养接触抑制(2)冲卵 体外受精(3)胚胎穆植冷冻(或:低温)(4)内细胞团细胞诱导分化
【解析】(1)原代培养指将动物组织用酶处理成单个细胞后进行的初次培养。接触抑制指贴壁的细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖的现象。(2)将早期胚胎从母牛子宫中冲洗出来的方法叫冲卵。(3)暂不进行胚胎移植的胚胎可放入-196 0C的液氮中冷冻保存。
(4)胚胎干细胞简称ES或EK细胞,是由早期胚胎或原始性腺分离出来的一类细胞。
3. 【答案】C
【解析】动物细胞培养需要无毒无菌的环境,甲过程指从实验小鼠身上取T皮肤组织,
该过程需要对小鼠进行消毒处理,A项正确;乙过程表示将得到的皮肤组织分散成单个细胞
制备成细胞悬液,可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶进行处理,B项正确;丙过程表示原代培养,
此时的细胞仍能保持正常的二倍体核型,C项错误;丁过程表示传代培养,此时得到的细胞
会克服细胞寿命的自然极限,获得不死性,这些细胞已经发生突变,正在朝着等同于癌细胞
的方向发展,D项正确。
【试题评价】本题以小鼠皮肤细胞培养为载体,综合考查了动物细胞培养相关操作过程
和考生的识记理解能力,涉及组织块的处理、原代培养和传代培养等相关内容,整体难度不
大。
4. 【答案】B
5. 【答案】BD
6. 【答案】D
【解析】①是获得已经免疫的 B 细胞,A 项错误;胰蛋白酶使得组织块分散为单个细
胞,B 项错误;③同时具有 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性,C 项错误;④经筛选后获得能够获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,D 项正确。
【试题评价】本题考查单克隆抗体制备流程相关只是和考生的识图能力,属理解层次,较易得分。
7. 【答案】B
【解析】消毒剂的使用既要杀死表面微生物,有防止伤害组织细胞,影响组织培养,A 项正确;植物细胞融合是指经纤维素酶和果胶酶处理后得到的原生质体的诱导融合,带有细
胞壁的愈伤组织细胞不能诱导融合形成染色体加倍的细胞,B 项错误;出芽和生根都是细胞再分化的结果,其实质是基因的选择性表达,C 项正确;α—萘乙酸为生长素类似物,可诱导愈伤组织生根,D 项正确。
【试题评价】本题考查植物组织培养相关知识和考生的理解能力,涉及外植体的消毒、植物体细胞杂交、细胞分化及植物生长调节剂对组织培养的影响等内容,较易得分。
8. 等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
【答案】(1)纤维素酶 果胶酶 原生质体 愈伤 再分化(或分红) 植物体细胞杂交技术
2)体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体在减数分裂过程中,前者染色体联会异常,而后者染色体联会正常 3)胚状体、不定芽、顶芽、腋芽
【试题点评】本题考查植物细胞工程相关内容并结合考查了多倍体育种,试题以识记考查为主,难度较低。
9. 1)纤维素酶和果胶酶
2) 叶绿体
3) 保持原生质体完整性 细胞壁
4) 双亲(或花椰菜和黑芥) 解离 漂洗
5)1、2、4 (6)黑腐病菌
【解析】
(1) 过程①表示原生质体的制备,要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁
(2) 用于融合的两个细胞,一个是黑芥苗的叶肉细胞,一个是花椰菜的根部细胞,其中供体细胞特有的结构是叶绿体,可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3) 原生质体没有细胞壁的保护,需要加入适宜浓度的甘露醇以保证渗透压的稳定,以避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性;原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞,进而形成愈伤组织。
(4) 分析再生植株染色体变异类型,需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞中的染色体制片观察进行比较,制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。
(5) 根据图谱,花椰菜含有碱基对为 300 和 600 的 DNA 片段,黑芥还有碱基对为 1000、 1300 和 1500 的片段,再生植株 3,只含有长度为 300 和 600 的片段,与花椰菜一致,1、2、
4 既含有花椰菜 DNA 片段,又含有黑芥 DNA 片段,为杂种植株。(6)对杂种植株接种黑腐病菌,能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。
【试题评价】本题以抗黑腐病花椰菜的培育为信息载体,综合考查了植物细胞工程、细胞分裂装片的制作观察、PCR 图谱的识别等相关内容,同时也考查了考生识图获取信息的能力,具有一定难度。
10. 【答案】B
【解析】植物组织培养不需要用胰蛋白酶,B 错误。
【试题点评】本题考察学生对细胞工程技术的了解,难度较低。
11. 【答案】A
【解析】草莓植株分生区的细胞含病毒的量比较少,可以利用植物组织培养技术培养出脱毒幼苗。
12. 【答案】(1)①A组:培养液中加入体细胞。 B组:培养液中加入体细胞,加入W。C组:培养液中加入癌细胞。D组:培养液中加入癌细胞,加入W。②胰蛋白酶④统计并分析所得数据。
(2)
【命题透析】本题以实验设计的形式,综合考查了必修和选修的相关内容。
【思路点拨】(1)本实验的目的是:完善生物制剂W对动物不同细胞的分裂具有促进作用的实验思路,有两个自变量:是否加入生物制剂W、动物细胞的种类。
(2)设计时应遵循单一变量及对照实验原则,进行重复实验可减少误差并使实验结果更为准确可靠,故分组时应分4组分别进行实验。
(3)胰蛋白酶用来分解组织细胞间的蛋白质,使组织细胞相互分散开来,有利于细胞的分裂。
(4)绘制曲线时,应注意横纵坐标及各组合的最终高度。
13. 答案: AD
解析:证明细胞全能性的实例必须满足的三个条件:起点:高度分化的细胞;终点:形成完整的个体;外部条件:离体、营养物质等。B为分子克隆,C为细胞克隆。
14. 答案:31.(1)降低 (2)适量的生长素 (3)③ (4)①④ 4 (5)增殖与分化 二倍体幼苗
解析:⑴2,4-D常用于植物愈伤组织的诱导和生长,但它趋向于抑制植物形态的发生,当愈伤组织再分化形成新的植株个体时,要减小2,4-D抑制植物形太发生的作用。所
以在配制分化培养基时需降低2,4-D的浓度。
⑵根据题意,此时已经出现具有分生能力的绿色芽点,但不能继续出芽。由于生长素有促进再分化过程中芽的生长,所以在培养基中添加适量的生长素,以促进幼苗形成。
⑶绿色芽点细胞为分生区细胞,排列紧密;刚融合的杂种细胞没有细胞壁,不可能发生质壁分离;愈伤组织细胞排列疏松无规则;再分化产生胚状体,需要光照刺激,会促进叶绿体的形成,可在光学显微镜下观察到叶绿体。
⑷色素具有不同的吸收光谱,叶绿素a、b主要吸收的是红光和蓝紫光。而对绿光和黄光吸收很少。在本题中,通过光合放氧速率反映出二者光合作用强度的大小,自变量是叶绿素a、b比例上的差异。从结果来看,二者放氧速率差异不大,而突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照。说明该同学用的光不是红色和蓝紫色。所以是绿色和黄色。通过纸层析法分离色素时,叶绿素a、b分布于第3、4条(自上而下)。因为突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照,所以会发现突变体第4条色素带窄于对照组。
⑸利用胚乳诱导愈伤组织,由于胚中含有植物激素,会影响愈伤组织的增殖和分化,所以需适时剔除胚。因为胚是由受精卵发育而来的,是二倍体。剔除胚也可以避免再生苗中混有二倍体幼苗。
15. 答案:D
16. 答案:A
17. 答案:B
18. 答案:31.(13分)1)探究X对Y细胞增殖(DNA合成)的影响
2)如果乙组CRD明显高于甲组,说明X对Y细胞增殖(DNA合成)有促进作用。如果乙组CRD与甲组基本相同,说明X对Y细胞增殖(DNA合成)无影响。如果乙组CRD明显低于甲组,说明X对Y细胞增殖(DNA合成)有抑制作用。(3)3H-TdR是DNA合成的原料之一,可根据CRD变化来判断细胞增殖(DNA合成)情况
19. 答案:(14分)1)分解细胞壁2)诱导原生质体融合3)两亲本失活部位不同,融合后活性部位互补
4)石油5)不加发酵液的石油浅水6)S 此期间,目的菌及其产生的絮凝活性高分子化合物的含量高
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